1. 納米抗體的概念：

納米抗體，又稱為駝?lì)悊斡蚩贵w。是存在于駝?lì)惡蛙浌囚~類中天然存在的僅由兩條重鏈組成的特殊抗體上的重鏈可變區(qū)（VHH, Variable domain of heavy chain antibody）。納米抗體晶體直徑為2.5nm，長(zhǎng)約4nm，分子量?jī)H為傳統(tǒng)的完整抗體的1/10（約15kD）但依然具有完整的抗原識(shí)別能力，并且可以單獨(dú)穩(wěn)定的在體外存在。

泰克生物建立了一個(gè)完善的，成熟的噬菌體抗體展示技術(shù)平臺(tái)，提供多種抗體文庫(kù)的構(gòu)建服務(wù)（人源scFV抗體文庫(kù)構(gòu)建服務(wù)、人源Fab抗體文庫(kù)構(gòu)建服務(wù)、羊駝VHH抗體文庫(kù)構(gòu)建服務(wù)、人源抗體噬菌體文庫(kù)制備服務(wù)、駱駝免疫VHH抗體庫(kù)構(gòu)建服務(wù)）和預(yù)制肽文庫(kù)/抗體庫(kù)篩選服務(wù)。其中，泰克生物從事羊駝VHH抗體制備已有9年多的時(shí)間，每年大約完成數(shù)百個(gè)羊駝VHH抗體構(gòu)建服務(wù)。

2. 相比于常規(guī)抗體，納米抗體的優(yōu)勢(shì)有：

（1）分子量小，易于滲透進(jìn)致密組織甚至是血腦屏障；

（2）親和力高、特異性強(qiáng)、溶解性及穩(wěn)定性好；

（3）人體的免疫原性弱，生物相容性好；

（4）原核或真核系統(tǒng)中高表達(dá)，易于生產(chǎn)；

（5）Nb結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易于工程化改造。

3. 納米抗體的制備：

圖1：納米抗體的制備流程圖

主要流程：羊駝免疫、噬菌體文庫(kù)構(gòu)建、抗體篩選、表達(dá)純化及驗(yàn)證等階段。

1、羊駝經(jīng)過抗原免疫后體內(nèi)產(chǎn)生成熟抗體。

2、采取免疫或未免疫的羊駝外周血液、分離羊駝外周血B淋巴細(xì)胞。

3、提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA為底物采用巢氏PCR擴(kuò)增出納米基因的基因片段。

4、然后將擴(kuò)增出的納米抗體的基因片段通過限制性內(nèi)切酶作用連接到噬菌體載體上。

5、將連接產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化至感受態(tài)TGl中，構(gòu)建出天然或免疫的羊駝源噬菌體展示納米抗體文庫(kù)。

6、通過抗原孵育和ELISA鑒定篩選出所需納米抗體,然后對(duì)其進(jìn)行測(cè)序。

7、納米抗體表達(dá)純化，納米抗體可在大腸桿菌，酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞系里進(jìn)行表達(dá)，因其僅含100多個(gè)氨基酸殘基，為驗(yàn)證其是否與抗原結(jié)合，可構(gòu)建質(zhì)粒在大腸桿菌中或酵母菌株中進(jìn)行快速表達(dá)及純化，或者同時(shí)在兩種菌株中進(jìn)行表達(dá)純化，驗(yàn)證表達(dá)結(jié)果。

8、大規(guī)模表達(dá)及純化，納米抗體可由大腸桿菌或酵母中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)并在發(fā)酵罐中大規(guī)模表達(dá)，其產(chǎn)量均在g/L以上，故可進(jìn)行量產(chǎn)應(yīng)用于試劑盒檢測(cè)，甚至臨床藥物規(guī)模化量產(chǎn)。