當免疫組化染色實驗操作到了顯色操作環節，說明之前環節的工作開展都比較順暢，也因此我們就更不能在染色顯色操作環節出現任何失誤，否則可能前功盡棄；同時，顯色液的污染還存在較大的健康安全隱患。本期就和大家一起交流染色顯色液配置及相關注意事項。
 

• 在配置顯色液之前，必須應嚴格按照說明書的配置順序操作，一般的配制順序是先加蒸餾水，然后加緩沖液，接著是底物H2O2，最后才添加 DAB 顯色劑。

• 記得要校正蒸餾水pH濃度(pH=7.0)，以確保實驗結果的準確性。若出現沉淀，要先進行過濾操作后才能使用。

• 同時注意現用現配，現配現用。配制好的溶液要避光存放，20 min內有效。另外配制順序錯誤也會影響顯色效果。

• 在做染色操作前，充分觀察常規切片和HE染色情況，盡可能找出陽性內對照部位。顯色時，一定要在顯微鏡下控制染色的深淺，以內對照部位出現稍濃于目的色的時間為該片的顯色時間。

• 如果無陽性對照，可選擇切片內的紅細胞(RBC)為片內對照，一般紅細胞（RBC）略微變色即可。

• 因為不同的抗體、組織、氣溫、水質等因素都會對顯色帶來影響，所以顯色時間的控制尤為重要，同時具備陽性對照最好。

• 顯色時間可控制在5~15min。如果實驗室室溫較高，時間需要縮短；室溫較低，則需要延長，但注意不能超過15min，不然容易導致背景上色。

DAB顯色劑具有致癌隱患，這個問題必須重視，避免污染技術人員、其他人員、科室和實驗室環境。

• 工具專用

因為DAB顯色劑會污染，具有致癌隱患，所以配制過程中要注意污染隱患。但為了切實切斷污染源頭，顯色操作所使用的器皿和顯微鏡要作為專用設備工具。在觀察時DAB難免污染顯微鏡，特別是滴染顯色常帶著顯色液觀察，如不專用極易對他人造成污染，并且每次使用完畢的器皿和顯微鏡要擦洗干凈和復位。

• 盡量避免顯色液滴落

鏡下控制顯色程度時，盡量不要把顯色液滴到臺面及顯微鏡上，也不要濺到衣物和皮膚上。

• 同一地點操作

從顯色液的配制到顯色操作實驗結束，整個操作過程均應在固定的環境和地點進行，如同一操作桌面上進行，這樣可以使DAB顯色劑的污染面積降到最小，清洗也容易，也不會有外滴風險。

• 實驗廢屑的處理

在顯色操作過程中難免會有廢屑產生，像一些擦拭紙等廢棄物，需要定期用硫酸液中和處理后再集中丟棄處理，這也是為了避免污染他人。

【參考文獻】

病理技術大講堂1001問-病理技術操作疑難點解惑答疑. 席越，陳軍主編.人民衛生出版社