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siRNA體內轉染技術與轉染方法概述

瀏覽次數:1725 發布日期:2022-11-15  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
RNA 代表核糖核酸和 siRNA——小干擾 RNA(也稱為沉默 RNA)。siRNA 是分子中的一種短 (21-23 bp) 雙鏈 RNA 核苷酸,在細胞中發揮各種生物系統的功能。siRNA轉染是“轉移”,將siRNA細胞內轉移到細胞中,這是一個涉及基因沉默的過程。為了成功優化 siRNA 轉染,需要合適的轉染試劑和轉染方法來進行體外和體內RNAi 實驗。這些過程因細胞類型和轉染方法而異。對于siRNA轉染有許多針對特定細胞類型優化的體外siRNA 轉染試劑。


siRNA轉染技術
體內siRNA于siRNA轉染技術 應用是基于納米顆粒、聚合物或 脂質體的一種技術。
科學家們發現 siRNA 在大規模沉默基因表達和研究基因功能方面比較有價值。此類實驗的成功通常取決于 siRNA的轉染方法?梢允褂脙灮 轉染試劑 和試劑盒在體外和體內轉染 siRNA。
影響siRNA 轉染效率的因素主要包括培養細胞的生長狀況、轉染發生的條件、引入的轉染方法、以及實驗中使用的 siRNA 的質量和數量。
同時,細胞密度、體積、暴露時間和 siRNA 細胞的數量對 siRNA 轉染的成功率以及在 穩定轉染實驗中建立穩定的 RNAi 敲低細胞系也起著重要作用。
RNAi 誘導的基因沉默通常用于研究培養細胞中的基因功能。大多數情況下,這些基因功能是由引入小干擾 RNA (siRNA) 或 microRNA (miRNA) 的介入所引起的。siRNA 分子屬于雙鏈,長度為 20-24 個堿基對,終止于具有磷酸化 5' 和羥基化 3' 末端的兩個突出核苷酸。一個 miRNA 分子是單鏈的,有 22 個核苷酸長;它與 RNA 的互補片段結合形成雙鏈分子。這兩種分子都可能在細胞中自然產生,也可能是人工引入的,它們的作用可能會持續三到七天。

siRNA體內轉染現狀
由于 siRNA 具有穩定性差、遞送效率低、生物分布不正確以及靶向特定組織等缺點,因此體內 RNAi 研究面臨了許多技術挑戰。這些技術挑戰意味著不適宜在動物身上進行 大量的RNAi 實驗。

siRNA體內轉染主要方法:是通過 RNAi技術:即:使用 siRNA 或 miRNA 、質粒 DNA 、病毒載體等,在體內表達生成短鏈 RNA (shRNA),隨后加工成活性 siRNA。一般來說,基于病毒的 shRNA 載體在體內提供較高的遞送效率,但構建起來比較耗費時間,并且存在免疫原性等問題。

使用 RNAi 技術面臨的主要挑戰之一是成功地將穩定的功能性 siRNA 或 microRNA 分子傳遞到目標組織。siRNA 或 miRNA 必須克服核酸酶的降解,逃避先天免疫系統的檢測,從而減少脫靶效應并被靶組織所吸收。近來研究發現對 siRNA 或 miRNA 進行化學修飾可以增加它們在體內的穩定性。這些化學修飾維持了 siRNA 分子的效力、功效和特異性,并增加了它們在生物體動態環境中的整體穩定性。

目前市場上常用的siRNA轉染試劑主要有RFect 系列轉染試劑盒、Lipo2000、Lipo3000,RNAiMAX等都可以用于siRNA的體外化學轉染法。
 

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發布者:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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標簽: 細胞轉染
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