mRNA疫苗開啟了人類挑戰(zhàn)疾病的新方式，甚至?xí)�改變醫(yī)藥行業(yè)的格局。我認(rèn)為基于mRNA疫苗和藥物的基礎(chǔ)研究甚至有可能獲得諾貝爾獎(jiǎng)。”紐約大學(xué)王俊教授這樣評(píng)價(jià)到（相關(guān)文章發(fā)表于《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》）。
 

2021年8月23號(hào)，德國(guó)生物科技公司拜恩泰科宣布，其與輝瑞聯(lián)合研發(fā)的mRNA新冠疫苗Comirnaty（中文商品名：復(fù)必泰）獲批美國(guó)藥監(jiān)局（FDA）的生物制品許可證申請(qǐng)（BLA）。該疫苗適用于16歲及以上的人群，以預(yù)防新冠病毒的感染。
 

該款疫苗是獲得FDA完全批準(zhǔn)的首款mRNA新冠疫苗，也是全球首個(gè)完全獲批的擁有完整三期臨床數(shù)據(jù)的新冠疫苗。BioNTech表示，Comirnaty自2020年12月11日在美國(guó)獲得緊急使用授權(quán)以來，已向全球120多個(gè)國(guó)家或地區(qū)提供了逾12億劑該新冠疫苗。
 

從2020年1月開始研發(fā)，到首次獲得FDA批準(zhǔn)，新冠疫情催生的mRNA疫苗的大放異彩，使其從默默無聞到一戰(zhàn)成名。
 

RNA的任務(wù)是在核糖體中將DNA翻譯后合成蛋白，人工合成的mRNA疫苗為核糖體提供病原體抗原的遺傳信息，發(fā)布合成病原體抗原的構(gòu)建指令。蛋白抗原合成后，激發(fā)機(jī)體的免疫系統(tǒng)識(shí)別并清除具有這些蛋白特定表面特性的病原體。
 

從結(jié)構(gòu)上來看，mRNA疫苗可分為兩大類：自擴(kuò)增性mRNA（self-amplifyingmRNA）和非復(fù)制型mRNA（non-replicatingmRNA）。無論是哪一種，都具有5‘和3’端的非翻譯區(qū)（untranslatedregions，UTRs），開放閱讀框和一個(gè)3’端的poly（A）尾巴。
 

自擴(kuò)增mRNA通常來源于正鏈RNA病毒的基因組，它既編碼目的抗原，又編碼細(xì)胞內(nèi)RNA擴(kuò)增和高水平抗原表達(dá)所需的病毒非結(jié)構(gòu)蛋白。非復(fù)制型mRNA一旦進(jìn)入細(xì)胞并從核內(nèi)體釋放到細(xì)胞質(zhì)中，mRNA立即被翻譯；
 

mRNA疫苗的關(guān)鍵質(zhì)量參數(shù)包括：

• poly-A尾巴的長(zhǎng)度，poly（A）尾與poly(A)結(jié)合蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，啟動(dòng)蛋白的合成（翻譯），并可通過降解脫帽酶（decapping enzymes）保護(hù)cap結(jié)構(gòu)；
• UTR的結(jié)構(gòu)和長(zhǎng)度，這是影響mRNA翻譯效率的主要的因素；
• mRNA的純度；
• 5’加帽的效率和結(jié)構(gòu)，Cap的結(jié)構(gòu)和mRNA的穩(wěn)定性密切相關(guān)；
• 編碼區(qū)的序列。

這些都會(huì)影響mRNA胞內(nèi)目的基因的表達(dá)。

目前業(yè)內(nèi)常用的mRNA純化方法包括，離子、分子篩和反向三種，離子交換層析的分辨率有待提高。分子篩的載量較低，反向使用較為廣泛，但其常常需要加入離子對(duì)，載量較低，且需要使用易燃、有毒有害的溶劑，不適用于生物制藥。
 

POROS™Oligo（dT）25親和填料，專門應(yīng)用于mRNA的捕獲純化。該填料采用聚苯乙烯-二乙烯基苯多聚體硬質(zhì)基質(zhì)，表面通過Linker鍵合25個(gè)dT配基，特異性捕獲mRNA的PolyA尾巴，能極大提高mRNA在捕獲階段的效率和載量。
 

此外，POROS Oligo（dT）25 擁有諸多優(yōu)勢(shì)：NaCl上樣，水洗脫；回收率＞90%；出色的放大性；無動(dòng)物源性。
 

據(jù)此，我們可將mRNA的純化工藝設(shè)計(jì)為如下所示：

與常規(guī)的核酸純化柱相比，POROS Oligo（dT）25的載量更高，除雜效率更好，下圖為使用HPLC法分析用不同方法純化的mRNA的純度，POROS Oligo （dT）25對(duì)雜質(zhì)有較高去除率。