在腦科學基礎研究領域中,腦內給藥已經成為大多數動物實驗的重要環節,動物手術前的麻醉不僅是為了減少動物疼痛滿足動物福利的要求,也是為了保證動物手術順利進行。
目前注射麻醉在我國的動物麻醉中最為普遍,其優點是不需要昂貴的設備,只需要注射器就行,但麻醉劑注射動物后,必須經肝臟代謝完后,動物才蘇醒;劑量過大會造成動物麻醉過度死亡,劑量過小動物不能進入麻醉狀態或進入麻醉狀態比較慢。在發達國家,氣體吸入式的麻醉非常普遍,與傳統的藥物注射麻醉方式相比,動物進入麻醉狀態較快,蘇醒也迅速,一旦停止麻醉,一般2分鐘內動物即可蘇醒麻醉深度容易控制,若在手術過程中發現動物狀態不佳,可馬上停止麻醉或者快速充氧進行搶救,因此安全性非常好;動物的發病率和死亡率低,動物手術的成功率高;更重要的是,吸入式麻醉劑在體內不參與代謝,幾乎完全由肺泡經呼吸排出,對實驗結果不造成影響,研究成果易得到國際認可。用于小鼠、大鼠、猴等實驗動物目標腦區的反復多次給藥,也可以結合配套光纖使用(光遺傳),在給藥的同時或者給藥后繼續對目標腦區進行光刺激。可應用于人類神經性疾病動物模型、高級腦功能、情感、認知等相關研究。
動物麻醉手術的腦內給藥
第 1 步:根據腦圖譜或文獻確定目標腦區的三維坐標:AP 值(Y 軸)、ML 值(X 軸)和 DV 值(Y 軸);
第 2 步:將動物麻醉,頭部固定到腦立體定位儀上,定位好目標腦區的 X/Y 水平坐標,顱鉆或牙科鉆鉆孔(同時在孔位附近鉆 2-3 個小孔,用于固定螺絲),然后用針輕微刺破硬腦膜;
第 3 步:將螺絲固定到孔內,然后將準備好的導管緩慢植入顱內,再用牙科水泥將螺絲和導管固定起來;
第 4 步:等待牙科水泥凝固后(約 15 分鐘左右),緩慢插入導管帽,鎖緊;根據實際情況判斷是否需要縫合皮膚;
第 5 步:動物恢復期,約 2-3 天即可恢復。在此期間,注意動物感染,及時預防;
第 6 步:將注射內管、PE 管、鎖緊螺帽、注射器提前組裝好,接著取出導管帽,將注射內管緩慢插入導管,鎖緊;
第 7 步:設置好注射量、注射速度,開始注射。注射完畢后,靜止約 10 分鐘,待藥物被充分吸收,然后緩慢拔出注射內管,繼續插入導管帽,鎖緊。
在具體的實際應用中,我們可以明顯地看到吸入式麻醉方式的優勢,下面就一些典型的動物實驗采用吸入式麻醉方式的優勢,說明如下:
1. 套管慢性給藥、微透析和光學刺激/生理信號記錄(光遺傳學)
導管植入顱內,待動物恢復后,首先拔出導管帽,然后植入注射內管(探針或光纖)、通過管路(光纖跳線)連接注射器(激光器)。然而,植入內管(探針或光纖)和連接管路(光纖跳線)這一過程,雖然花費時間很短,也就幾分鐘的時間,如果動物不麻醉,動物會掙扎,配合不好,導致無法插管(插入光纖);如果在戊巴比妥鈉、烏拉坦等注射麻醉后進行,操作容易進行,但是這些麻醉方式的維持時間很長,往往達3-5個小時,不利于后期做清醒自由活動動物的給藥或光刺激,而且額外增加了使用這些麻醉劑帶來的副作用,測得的指標不準確,影響實驗結果的客觀性和可靠性。然而,如果使用吸入式麻醉,則避免了這些問題的發生,而且操作簡單,只需將動物放置于實驗平臺上,帶上麻醉面罩,即可開始進行操作。
2. 深度手術
常見的一些開胸或深度手術,比如,進行心腦血管方面研究的MCAO腦缺血、心肌缺血造模,動物死亡率往往較高,與采用注射麻醉的方式有很大關系,比如麻醉時間過長、麻醉深度無法掌控、手術過程中出現異常無法搶救、動物蘇醒較慢、麻醉劑的呼吸抑制作用較強等原因都有可能導致這一結果。然而,如果使用吸入式麻醉,可以避免使用注射麻醉導致的負面結果,既保證手術過程可控、順利進行,又可保證手術后動物很快蘇醒,極大地降低了動物的死亡率;而且操作簡單,只需將動物放置于實驗平臺上,帶上面罩,即可開始進行操作。
3. 取血過程
取血是動物研究中常見的一類技術,常見的取血方式有靜脈、動脈、眼眶、心臟取血。在這些取血過程中,傳統的做法是直接用手抓取固定動物后開始采血,或者用乙醚、注射麻醉后采血,然而,這些方式都有一定的缺點,比如,如果直接抓取固定動物,會對動物增加額外壓力,產生應激反應,抽取的血液相關指標必會受到影響;如果用乙醚麻醉,麻醉時間較短,如果取血操作不熟練,需要進行多次麻醉,而且乙醚刺激性非常強,人體吸入后非常不舒服,對動物的呼吸道刺激也很強烈,麻醉時需要專人看護,否則動物極易死亡。如果使用吸入麻醉,則克服了這些困難,而且操作簡單,只需將動物放置于實驗平臺上,帶上麻醉面罩,即可開始進行操作,如果進行批量采血,效率非常高。
4. 靜脈注射給藥
注射給藥的方法,包括肌肉、皮下、靜脈注射。注射前,傳統的動物固定方式采用的是固定器,然而,即便動物固定后,往往也不是很配合,再加上尾靜脈注射操作難度較高,所以一次性注射的成功率較低,而且固定動物的操作花費時間較長;如果為了讓動物保持安靜,給動物進行注射麻醉,結果是注射操作容易進行,但是動物麻醉時間過長,不排除動物有死亡而無法搶救的風險。如果在注射藥物前,使用吸入式進行麻醉,將動物直接放置于實驗平臺上,帶上麻醉面罩,動物將非常安靜,有利于靜脈注射藥物,工作效率大大提高,移除面罩后,動物很快蘇醒,死亡風險幾乎沒有,而且吸入式麻醉劑不參與體內代謝,對生理指標不產生影響。
小動物麻醉機性能穩定、操作方便。可應用于開放式面罩麻醉,或連接呼吸機氣囊;能快速控制麻醉深度,確保麻醉動物的安全。精確的刻度調節可保證輸出的準確性;安全鎖定裝置防止麻醉藥意外揮發。可搭配現有腦立體定位儀使用,應用于大鼠/小鼠氣體麻醉。
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