近紅外染料的選用指南

瀏覽次數：4871　發布日期：2012-7-19　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

Near-IR CF™ Dyes

熒光強度最高、最穩定的長波長染料。特別適合于活體動物體內成像

Near-IR CF dye flyer

CF dye selection guide

什么是近紅外染料？

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圖 1. Cy7，AlexaFluor750 和 CF750染料穩定性測試比較。圖示為染料在陽光照射30分鐘前（黑線）和照射后（灰線）的吸收光譜圖。

近紅外 CF 染料是由 Biotium 公司科研人員開發的一組吸收和發射波長在 650 到 800nm 之間的熒光染料。近紅外 CF 染料是為蛋白標記開發的，熒光強度遠比其他相似波長的商業化染料更高，同時也更穩定。

近紅外染料和傳統的可見光染料相比有顯著的優勢。由于細胞和組織的自發熒光在近紅外波段最小，因此在檢測復雜生物系統時，近紅外染料能提供更高的特異性和靈敏度。同時，由于光波在近紅外區段的組織透過性更好，因此近紅外染料尤其適合體內熒光成像（活體成像）這一近幾年迅速發展的新興領域。另外，近紅外染料也是細胞內/全細胞免疫印記和傳統基于膜介質免疫印記的理想染料。

圖 2. 用同型對照或鼠抗人CD3抗體作為一抗，用APC-AlexaFluor750 (Invitrogen) 或CF750標記的山羊抗鼠二抗染色Jurkat細胞。抗體用量如圖上所列。用BD LSR II 流式細胞儀的633 nm激光器和780/60 nm PMT檢測器分析熒光。柱狀圖代表了相對熒光值的幾何均數。

近紅外 CF 染料作為新一代的長波長染料，代表了這一領域的重大突破。現有商業化的近紅外染料，由于染料的過分聚集以及穩定性差，因而受制于熒光亮度有限的問題。得益于 Biotium 公司科研人員采用的創新型分子工程學技術，近紅外 CF 染料克服了上述問題，從而比其他競爭產品具備了關鍵性的優勢：近紅外 CF染料熒光強度極高并且非常穩定。例如CF750 亮度高至可以在 633nm 處激發（即在吸收峰值的肩部激發），而此時在 770 nm 左右的熒光發射強度仍然高于基于APC的串聯染料。因此，近紅外 CF 染料特別適合于流式細胞儀的各種應用，從而可以避免串聯染料穩定性等帶來的問題。

另外，近紅外 CF 染料擁有專利的結構特性，這使近紅外 CF染料和其他競爭產品相比免疫源性更小。因此，在標記同一個蛋白時，可以連接更多的近紅外 CF 染料以獲得最大的熒光亮度。同時，這樣標記獲得的蛋白復合物在體內的半衰期也更長。

最后一點，由于近紅外 CF 染料優異的溶解性和大于 95% 的活化程度，它的標記效率也遠遠高于其他近紅外染料。

產品特點：

亮度: CF染料在亮度上達到或者超過Alexa Fluor和Cy 等其它商業化的染料.
光穩定性: CF染料的光穩定性在同類染料中屈指可數.
特異性和體內穩定性:CF標記的抗體具有高度的特異性，同時還能延長抗體在體內成像時的半衰期.
對pH值不敏感: CF染料在很寬的pH值范圍內都能維持高亮度的熒光.
溶解性: CF染料在水以及各種有機溶劑中有高度的溶解性.
兼容性:CF染料的光譜特性和其他商業化的染料相似，兼容常見的激發光
源和現有的各種濾片.
多種顏色可供選擇: CF系列染料包括了從紫外到近紅外的多種顏色的染料可供選擇.

產品應用：

體內成像: CF活化染料和試劑盒非常適合活體成像（小動物體內成像技術）
免疫印記: 用高度交叉吸收后的抗體進行免疫印記可使交叉反應和背景降至最低
蛋白標記: CF活化染料和試劑盒用于定制標記復合物
流式細胞儀: 優異的非串聯標記復合物用于細胞染色
顯微成像: 高亮度，光穩定的抗體和活化染料可用于多重標記

圖 3. 柱狀圖代表了圖2中相對熒光值幾何均數的信噪比。

圖 4.分別用CF750，AlexaFluor750或Cy7標記山羊抗鼠IgG二抗。用Hitachi F-4500熒光光度計測定熒光強度。上圖所示為均一化的熒光值。

圖 6. 用胞內CD3抗體或者同型對照孵育Jurkat 細胞并分別用1ug標記了Cy5.5，AlexaFluor680，CF680 或 DyLight680的山羊抗鼠 IgG 熒光二抗染色。用BD FACS Calibur流式細胞儀的FL4通道檢測熒光。柱狀圖代表了CD3陽性熒光值和標記程度（DOL）相似的同型對照相比的信噪比。

圖 5.分別用CF750，AlexaFluor750或Cy7標記山羊抗鼠IgG二抗。染料復合物的吸收光譜分別對各自的最大吸收值做均一化。Cy7和AlexaFluor750染料有較大的肩峰，顯示了染料的高度聚集，而這種聚集對整體熒光強度是沒有貢獻的。

圖 8. 用胞內CD3抗體或者同型對照孵育Jurkat 細胞并分別用1ug標記了CF770，DyLight 800 或 IRDye800CW的山羊抗鼠 IgG 熒光二抗染色。用BD LSR II 流式細胞儀的633 nm激光器和780/60 nm PMT檢測器分析熒光。柱狀圖代表了相對熒光值的幾何均數。

圖 7.用鼠抗alpha-tubulin作為一抗，標記了CF680的山羊抗鼠IgG作為二抗染色HeLa細胞。使用以汞電弧燈作為光源的Olympus顯微鏡拍照，使用Cy5 濾鏡組，CCD相機和 ImagePro Express軟件獲取照片。

圖 9. 細胞數量2倍稀釋的HeLa細胞培養在一塊黑色側壁，底部透明的96孔板中。將細胞固定、透膜并用鼠抗alpha-tubulin和兔抗COX IV分別作為一抗，選用CF770或IRDye 800(綠色)標記的山羊抗鼠IgG作為二抗，或者選用CF680或IRDye680(紅色)標記的山羊抗兔IgG作為二抗染色，抗體的終濃度相同。染色后，細胞被干燥并用Odyssey®紅外成像系統（Li-Cor）掃描。上面的兩行細胞是用CF染料抗體復合物染色的，對應的下面兩行細胞是用商品化購買的IRDye二抗（Li-Cor）染色的。

圖 10. 兩倍稀釋的HeLa 細胞裂解液先在聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳，然后轉印至硝酸纖維素膜上，并用鼠抗alpha-tubulin和兔抗COX IV分別作為一抗，選用CF770或IRDye 800(綠色)標記的山羊抗鼠IgG作為二抗，或者選用CF680或IRDye680(紅色)標記的山羊抗兔IgG作為二抗染色，抗體的終濃度相同。染色后，膜被干燥并用Odyssey®紅外成像系統（Li-Cor Biosciences）掃描。對條帶定量后發現，CF染料的熒光強度大約是相對應IRDye 二抗（Li-Cor）的3.5倍。