細胞消化的關(guān)鍵技術(shù)要點

瀏覽次數(shù)：661　發(fā)布日期：2024-5-13　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責任自負

一，細胞潤洗次數(shù)

絕大部分細胞用胰酶潤洗一次即可

胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時，細胞由于自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。

由于在細胞培養(yǎng)中，胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。胰酶作用時間過長、作用次數(shù)過多，都容易破壞細胞表面結(jié)構(gòu)。

在吸去培養(yǎng)基后，用37℃預(yù)熱過的PBS潤洗細胞表面1-2次，隨后加入適量胰酶，以能夠平鋪在器皿底部一層，略蓋過細胞為原則�？煞湃�37℃培養(yǎng)箱中孵育1-2分鐘。

二，何時終止消化

貼壁細胞層呈流沙狀可移動即可終止消化

有不少細胞培養(yǎng)人員，喜歡把全部細胞，消化成間隔分布很離散的單個圓形的細胞，但實際上，此時的細胞已經(jīng)處于“消化過度”的狀態(tài)了。

因此，肉眼觀察下，50%左右細胞呈現(xiàn)流沙狀，或鏡下觀察細胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片，即可加入胰酶2-3倍體積的含血清培養(yǎng)基，終止消化。

逐典TrypLUS消化液是一種胰蛋白酶類似物（Trypsin Like Enzyme），是一種通過生物工程制備的非動物源性重組蛋白酶，與胰蛋白酶有相似的解離動力學(xué)，穩(wěn)定性更高，純度更好，消化更溫和，細胞毒性更低。目前主要應(yīng)用于細胞培養(yǎng)中，可以在賴氨酸和精氨酸的C末端切割肽鍵，可以替代豬或牛胰蛋白酶（Trypsin）對貼壁細胞的消化解離。生物制藥中，GMP級別的TrypLUS能夠為疫苗生產(chǎn)、病毒載體生產(chǎn)提供高質(zhì)量和高性價比的貼壁細胞消化解決方案。