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如何選擇適合的外泌體提取方法詳解

瀏覽次數(shù)：752　發(fā)布日期：2023-9-7　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

超速離心法、尺寸排阻分離法、超濾法，還有沉淀法，面對眾多的外泌體分離方法，究竟怎樣確定哪種方法是最適合后續(xù)實驗分析呢？

梅奧醫(yī)學中心的科研工作者們利用糞便上清分離胞外囊泡（EV），用于結直腸癌早期診斷。他們評估了五種EV分離方法（超速離心[UC]、沉淀[EQ -O、EQ-TC]、尺寸排阻分離柱[SEC]和超濾[UF]）的總回收率、重現(xiàn)性、純度、RNA組成和糞便上清液中的蛋白質(zhì)表達。

為了估計EV的直徑，研究人員使用Apogee Micro-Plus納米流式細胞儀獲取散射光數(shù)據(jù)，并將每個珠群的側散射強度轉換為納米，獲得EV的直徑。為了測量EV分離/富集方法的回收效率，他們比較了分離/富集前后五個糞便樣本的顆粒數(shù)，觀察到超濾和尺寸排阻分離柱是回收顆粒的最有效方法。

通過Western blot分析發(fā)現(xiàn)超速離心法和尺寸排阻分離柱獲得更高的顆粒與蛋白比。根據(jù)提取的RNA純度的分析顯示，尺寸排阻分離柱是最--好的EV分離方法。

研究人員在測試的五種技術中，認為尺寸排阻分離柱是基于回收率和純度參數(shù)的最適合糞便上清液的EV分離方法。在未來，該方法可用于研究糞便衍生的EVs，作為生物標志物的潛在來源，以提高結直腸癌變之前的檢測。

qEV尺寸排阻分離柱是由新西蘭IZON公司研發(fā)和生產(chǎn)的一種基于尺寸排阻色譜法（Size Exclusion Chromatography, SEC）原理的外泌體分離-純化技術。該技術具有簡便、快速、容易標準化操作的特點，只需要15min就可以從多種類型樣本中提取到完整的高純度外泌體。相較于其他方法，qEV所提取的外泌體純度更高、濃度更高、活性也更高，還可以重復使用。qEV分離的外泌體尤其適用于外泌體蛋白組和外泌體功能實驗。

Apogee Micro-Plus納米流式細胞儀（nFCM）可以分辨尺寸范圍為80nm至1300nm的聚苯乙、烯和二氧化硅微球，專門為檢測納米級小顆粒設計，非常適合細胞外囊泡、外泌體、大病毒和納米顆粒的分析，能快速獲取樣本中細胞外囊泡的尺寸信息，準確濃度以及生物標志物的表達。

純度高，活性好的樣本是細胞外囊泡功能分析的基礎，檢測速度快，準確度高是分析細胞外囊泡的有力工具，歡迎前來伯齊科技咨詢qEV尺寸排阻分離柱和Apogee納米流式細胞儀。