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考馬斯亮藍(lán)法測蛋白含量測定試劑盒使用說明書

瀏覽次數(shù):1070 發(fā)布日期:2022-7-25  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
考馬斯亮藍(lán)法測蛋白含量測定試劑盒說明書
分光光度法  50/48
 
    意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
 
測定原理:
在酸性溶液中,考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物;該復(fù)合物在620nm處有最大吸收峰, 其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高,適合微量蛋白質(zhì)分析。
 
自備儀器和用品:
離心機(jī)、分光光度計(jì)、石英比色皿、移液器和蒸餾水。
 
試劑組成和配制:
試劑一:液體30 mL×1瓶,4℃保存。
 
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取:
  • 液體樣品:澄清液體樣品可以直接測定。
  • 組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:20的比例(建議稱取約0.05 g組織,加入1mL提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水))
冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即待測液。(動物樣品常常需要稀釋)
  • 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
 
測定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,蒸餾水調(diào)零。
2. 在石英比色皿中加入:
試劑(μL) 測定管 空白管
樣本 500  
蒸餾水   500
試劑一 500 500
混勻后,測定波長620 nm吸光值,△A=A測定-A空白。
注意:空白管只需要測定一次。
 
計(jì)算公式:
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 14.253x - 0.0007  R2 = 0.9997    x: 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL)    y: 吸光值差值
1.按液體樣本體積計(jì)算:
Cpr(mg/mL)=(△A+0.0007)÷14.253=0.07×(△A+0.0007)
2.按組織樣本質(zhì)量計(jì)算:
Cpr(mg/g)=(△A+0.0007)÷14.253×V總÷W=0.07×(△A+0.0007)÷W
V總:提取液體積,1 mL; W:樣本質(zhì)量,g。
發(fā)布者:上海雅吉生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-34661276
E-mail:58268971@qq.com

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