細胞轉(zhuǎn)染現(xiàn)在是分子生物學(xué)的核心技術(shù)，也是基因制藥的必要前提。免疫穿孔轉(zhuǎn)染法技術(shù)是用涂有抗體并與特定細胞表面跨膜蛋白結(jié)合的珠子如何在移除珠子時在細胞中產(chǎn)生孔，從而允許用 DNA 或其他大分子轉(zhuǎn)染細胞。這種通過免疫穿孔對細胞進行的獨特靶向轉(zhuǎn)染非常有效，并且減少細胞凋亡。
免疫穿孔轉(zhuǎn)染法的原理

轉(zhuǎn)染細胞有多種方法，比如電穿孔 、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染 、磷酸鈣共沉淀 和 DEAE葡聚糖等方法 . 在這些方法中，只有電穿孔提供了將 DNA 和其他分子（如蛋白質(zhì)）引入活細胞的可能性。目前的方法都不能針對特定類型的細胞進行轉(zhuǎn)染。在這種新的細胞轉(zhuǎn)染方法中，抗體包被的珠子與特定的表面抗原結(jié)合，然后通過混合將珠子從細胞中剪下：這會在細胞膜上形成瞬時孔，大分子可以通過這些孔進入。粒細胞、分化的人淋巴母細胞 HL-60 細胞通常在其表面表達 CD71。當(dāng)在二甲基亞砜 (DMSO) 存在下誘導(dǎo)分化時，細胞停止表達 CD71，而是表達 CD11b。

免疫穿孔細胞轉(zhuǎn)染法的基本過程
將涂有抗 CD11b 抗體 (DYNAFECT-CD11b) 或抗 CD71 抗體 (DYNAFECT-CD71) 的 DYNAFECT 珠子在旋轉(zhuǎn)的上下混合器上以 33 rpm 在 22 °C 下混合 6 小時，與未誘導(dǎo)的 HL- 60 個細胞或用 DMSO 誘導(dǎo) 3 天的細胞。為了在 2-ml 微量離心管中混合，可將 10 7 個磁珠和 5×10 5 個細胞懸浮在含有 0.2 μg 編碼綠色熒光蛋白的質(zhì)粒 DNA 載體 pEGFP-C1（4.7 kb）的 0.5 ml 轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基（Dynal AS）中。轉(zhuǎn)染后，使用磁力分離器去除磁珠，將細胞轉(zhuǎn)移回組織培養(yǎng)基中并在分析前再培養(yǎng) 48 小時。



通過流式細胞技術(shù)來確定細胞轉(zhuǎn)染的程度。 DYNAFECT-CD71 微珠促進 DNA 轉(zhuǎn)染到正常的 HL-60 細胞中，但當(dāng)細胞分化且不再表達 CD71 時，這些微珠不再發(fā)生轉(zhuǎn)染。相反，將未分化的 HL-60 細胞與 DYNAFECT-CD11b 珠子混合不會導(dǎo)致細胞被 DNA 轉(zhuǎn)染，但當(dāng)細胞分化并開始表達 CD11b 時，這些磁珠確實會被轉(zhuǎn)染。

因此，免疫穿孔有可能靶向混合群體中特定類型的細胞進行轉(zhuǎn)染，這取決于它們的免疫特性，并允許靶向細胞吸收各種不同的分子。這也發(fā)生在幾種哺乳動物細胞系中，這些細胞系具有一系列針對選定細胞表面抗原的不同抗體。正常情況下，細胞轉(zhuǎn)染水平為 40-80%，具體取決于混合條件，而無活力細胞的數(shù)量通常會少于20%。