小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞研究及應(yīng)用
血管是生物體運(yùn)送血液的管道，為機(jī)體正常的新陳代謝和生長提供必要的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，并輸送走有害物質(zhì)。血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cells ,VECs)是血管壁與血液中間的分界細(xì)胞。人體VEC表面面積的總和達(dá)6000m2，細(xì)胞總量達(dá)1011，重量達(dá)1000-2000g。VEC的形態(tài)呈單層、扁平、梭形或多邊形。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力，調(diào)節(jié)血壓，抗血栓形成等有重要作用，具有相當(dāng)活躍的內(nèi)分泌和代謝功能，在血管通透性屏障、 免疫防御及炎性反應(yīng)中起著極其重要的作用，在高血壓，心、腦血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。
量研究表明血管內(nèi)皮細(xì)胞是許多心血管疾病或危險因子作用的重要靶器官，具有相當(dāng)活躍的內(nèi)分泌和代謝功能，血管內(nèi)皮細(xì)胞涉及多種疾病的發(fā)病機(jī)制，因而建立血管內(nèi)皮細(xì)胞體外分離培養(yǎng)方法對于研究內(nèi)皮細(xì)胞特性、對作用于血管的藥物及抗腫瘤藥物的研發(fā)具有重要意義。大鼠主動脈血管內(nèi)皮分離簡單，容易培養(yǎng)，可在體外連續(xù)傳代培養(yǎng)。目前關(guān)于血管內(nèi)皮細(xì)胞的實驗研究主要集中于大鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞。而對于小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究相對較少。小鼠主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分離難度高，純度低，易受雜細(xì)胞污染，如成纖維細(xì)胞。小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞對生長環(huán)境營養(yǎng)要求高，易老化，凍存后復(fù)蘇難。
大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞與小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)上差別較大，大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞胞體較大，形態(tài)偏梭形，傳代后增殖速度較快，傳代次數(shù)穩(wěn)定。血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物有CD31、vWF、CD34、第Ⅷ因子等。CD31作為細(xì)胞標(biāo)志物之一，近年來較多的被應(yīng)用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定。
統(tǒng)獲取主動脈小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離方法有機(jī)械刮取法、血管內(nèi)壁消化法、組織塊貼壁法等。其中機(jī)械刮取法容易對細(xì)胞造成損傷，影響細(xì)胞活性。血管內(nèi)壁消化法是將內(nèi)膜外翻進(jìn)行消化，操作難度大。組織塊貼壁法操作簡單，但培養(yǎng)周期長，并且易受雜細(xì)胞污染。齊氏生物在總結(jié)前人方法的基礎(chǔ)上，應(yīng)用改良的酶消化法，分離得到的小鼠胸主動脈血管細(xì)胞純度高，成活率高，增殖速度快，可用于高血壓，心、腦血管疾病發(fā)生發(fā)展研究以及心血管藥物的研究及多種生理生化實驗的要求。
圖1 血管細(xì)胞組成
圖2 血管內(nèi)皮細(xì)胞與疾病
量研究表明血管內(nèi)皮細(xì)胞是許多心血管疾病或危險因子作用的重要靶器官，具有相當(dāng)活躍的內(nèi)分泌和代謝功能，血管內(nèi)皮細(xì)胞涉及多種疾病的發(fā)病機(jī)制，因而建立血管內(nèi)皮細(xì)胞體外分離培養(yǎng)方法對于研究內(nèi)皮細(xì)胞特性、對作用于血管的藥物及抗腫瘤藥物的研發(fā)具有重要意義。大鼠主動脈血管內(nèi)皮分離簡單，容易培養(yǎng)，可在體外連續(xù)傳代培養(yǎng)。目前關(guān)于血管內(nèi)皮細(xì)胞的實驗研究主要集中于大鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞。而對于小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究相對較少。小鼠主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞分離難度高，純度低，易受雜細(xì)胞污染，如成纖維細(xì)胞。小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞對生長環(huán)境營養(yǎng)要求高，易老化，凍存后復(fù)蘇難。
圖3 大鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞
小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞來源于成年小鼠胸主動脈組織，是鋪于血管內(nèi)壁的一層多功能細(xì)胞，大多呈類圓形或多邊形，形成單層后呈鋪路石樣排列。圖4 小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞
大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞與小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)上差別較大，大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞胞體較大，形態(tài)偏梭形，傳代后增殖速度較快，傳代次數(shù)穩(wěn)定。血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物有CD31、vWF、CD34、第Ⅷ因子等。CD31作為細(xì)胞標(biāo)志物之一，近年來較多的被應(yīng)用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定。
圖5 小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 vWF免疫熒光鑒定圖(100×)
統(tǒng)獲取主動脈小鼠胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離方法有機(jī)械刮取法、血管內(nèi)壁消化法、組織塊貼壁法等。其中機(jī)械刮取法容易對細(xì)胞造成損傷，影響細(xì)胞活性。血管內(nèi)壁消化法是將內(nèi)膜外翻進(jìn)行消化，操作難度大。組織塊貼壁法操作簡單，但培養(yǎng)周期長，并且易受雜細(xì)胞污染。齊氏生物在總結(jié)前人方法的基礎(chǔ)上，應(yīng)用改良的酶消化法，分離得到的小鼠胸主動脈血管細(xì)胞純度高，成活率高，增殖速度快，可用于高血壓，心、腦血管疾病發(fā)生發(fā)展研究以及心血管藥物的研究及多種生理生化實驗的要求。
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