說明
肝組織模型試劑盒提供了用于包封肝細(xì)胞和/或星狀細(xì)胞的最佳生物墨水，然后進(jìn)一步利用所提供的抗體通過免疫熒光或免疫組織化學(xué)進(jìn)行功能分析。

包含：
CELLINK LAMININK 111 bioink-3 mL
Ⅰ型膠原抗體*-100µL
ABCC2抗體*-100µL
CYP3A43抗體*-100µL

*宿主：兔，已驗(yàn)證物種反應(yīng)性：人 1

儲(chǔ)存
生物墨水應(yīng)該儲(chǔ)存在攝氏4到8度之間。生物墨水的保質(zhì)期是兩個(gè)月。包裝上注明了有效期。在儲(chǔ)存之前，確保墨盒蓋上蓋子，以防干燥。保持生物墨水不凍-將生物墨水放入冷凍室有可能損害其印刷適性。

抗體到達(dá)后應(yīng)保存在-20°C。當(dāng)儲(chǔ)存在-20°C時(shí)，抗體的作用至少為12個(gè)月。注意，抗體是非常穩(wěn)定的，當(dāng)適當(dāng)儲(chǔ)存時(shí)，可以使用更長的時(shí)間。抗體在-20°C保存前不需要等分。由于抗體是在甘油中提供的，它們在推薦的儲(chǔ)存溫度下不會(huì)凍結(jié)，因此不會(huì)暴露于冷凍/解凍循環(huán)中。

與細(xì)胞混合
我們建議將生物墨水與高濃度的細(xì)胞混合。您可以手動(dòng)混合細(xì)胞，也可以使用我們革命性的細(xì)胞混合器，以獲得更大的數(shù)量。CELLMIXER的設(shè)計(jì)目的是簡化混合過程，并使細(xì)胞的存活率提高，從而獲得均勻的懸浮液。有關(guān)更多詳細(xì)信息，請參閱Mixing with Cells Protocol CELLINK

生物打印組織模型
肝組織模型可以通過在所需生物墨水（CELLINK LAMININK 111）中逐層生物打印肝細(xì)胞和/或星狀細(xì)胞來生成。如果用原代細(xì)胞進(jìn)行生物打印，有限的細(xì)胞數(shù)目將限制構(gòu)建體的大小。因此，10-50µL的結(jié)構(gòu)、液滴或圓盤足以用于藥物篩選目的。還可以生成更大的構(gòu)造，特別是當(dāng)需要單元格分層時(shí)。

交聯(lián)
用含CaCl2的交聯(lián)溶液進(jìn)行GelXA LAMININK 111生物打印的構(gòu)建體的交聯(lián)。生物打印后，應(yīng)用足夠的液滴交聯(lián)溶液覆蓋構(gòu)建物。30秒到5分鐘的孵育時(shí)間對于大多數(shù)結(jié)構(gòu)來說是足夠的。孵育后，除去交聯(lián)液，用含鈣和鎂的Hank's平衡鹽溶液(HBSS+/+)或基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌并加入所需的細(xì)胞培養(yǎng)基。

組織學(xué)分析
要獲得生物打印結(jié)構(gòu)的5-8µm切片，請參閱CELLINK網(wǎng)站支持部分下的固定、嵌入和切片協(xié)議CELLINK系列。然后按照免疫熒光染色程序CELLINK  Series對組織模型進(jìn)行抗體染色。I型膠原、ABCC2和CYP3A43抗體的稀釋度如下：

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CELLINK LAMININK 111 Bioink的描述
CELLINK層狀油墨111除了對光不敏感之外，在任何溫度下具有穩(wěn)定的印刷適性是有利的。利用CELLINK的優(yōu)化的染色和分析協(xié)議，CELLINK LAMININIK 111生物墨水提供了一個(gè)平滑的3D生物打印過程，其中的焦點(diǎn)允許在獲得的結(jié)果。CELLINK bioink中的納米纖維素提供了可影響不同肝細(xì)胞類型的相互連接的原纖維網(wǎng)絡(luò)，例如，潛在地促進(jìn)膽管網(wǎng)絡(luò)的形成或共培養(yǎng)組織模型中星狀細(xì)胞的排列。

抗體描述
肝組織模型的直接功能分析可以通過免疫熒光或免疫組化的組織學(xué)分析進(jìn)行。肝組織模型試劑盒中包含的抗體用于肝細(xì)胞和星狀細(xì)胞在生物打印構(gòu)建體中的單一或共培養(yǎng)。I型膠原抗體是用來評估在纖維化誘導(dǎo)過程中星狀細(xì)胞產(chǎn)生I型膠原的情況。ABCC2抗體用于評價(jià)肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)體多藥耐藥蛋白2(MRP2),CYP3A43抗體用于分析細(xì)胞色素P450中負(fù)責(zé)藥物代謝的一種酶。

肝抗體數(shù)據(jù)
用包括初級抗體I型膠原、ABCC2和CYP3A43的免疫熒光分析的內(nèi)部數(shù)據(jù)證明了對不同肝細(xì)胞類型和來源的優(yōu)化使用。
 

圖1:實(shí)施例I型膠原在用共培養(yǎng)LX2和HepG2細(xì)胞增強(qiáng)的3D生物打印CELLINK LAMININK 111中的表達(dá)。合并圖像I型膠原表達(dá)（1:50稀釋度），綠色，細(xì)胞核用DAPI（1:50稀釋度）染色，藍(lán)色。二抗：Alexa Fluor 488。放大倍數(shù)：10倍，刻度線：100µm。
 

圖2. 用共培養(yǎng)的LX2 和HepG2 細(xì)胞增重的3D生物打印的CELLINK LAMININK 111 中ABCC2表達(dá)的實(shí)例。ABCC2(MRP2)抗體既可用于肝細(xì)胞HepG2細(xì)胞株的染色，也可用于原代肝細(xì)胞的染色。合并圖像ABCC2表達(dá)（1:20 0稀釋度）,綠色,細(xì)胞核染色DAPI（1:50 稀釋度）,藍(lán)色.二抗：Alexa Fluor 488。放大倍數(shù)：10倍，刻度線：100µm。
 

圖3.作為肝組織模型的3D生物打印的原代肝細(xì)胞中CYP3A43表達(dá)的實(shí)例。CYP3A43抗體可用于原代肝細(xì)胞的團(tuán)簇和單細(xì)胞染色。合并圖像CYP3A43表達(dá)（1:10  00稀釋度）,綠色,細(xì)胞核DAPI（1:50稀釋度）染色,藍(lán)色。二抗：Alexa Fluor 488。放大倍數(shù)：10倍，刻度線： 100µm。