細胞轉染、重組蛋白、熒光素酶檢測試劑盒實驗介紹
■ PolyFast 轉染試劑 (PolyFast Transfection Reagent)
細胞轉染主要將 DNA/RNA 導入真核細胞；轉染方法五花八門，常見的轉染方法可分為化學法、物理法和生物法。但是沒有一種方法是可以通用的，所以不少研究者在實際實驗過程中難免踩雷....
來！先了解一下常見的幾項轉染技術
不同轉染技術都有各自明顯的優缺點，是不是不知道該怎么選擇啦？告訴你一個絕招吧PolyFast Transfection Reagent！其原理是當帶正電荷的聚合物和帶負電荷的 DNA/RNA 結合成復合物后，通過胞吞作用進入細胞，并在胞質中將核酸釋放出來，完成轉染。
操作簡單，適用性廣，在體內和體外都有很高的轉染效率，且對細胞幾乎沒有毒性，這可是轉染實驗中的一大法寶。
■ Anti-Flag 親和凝膠 (Anti-Flag Affinity Gel)
體外重組蛋白表達技術是較常用的蛋白分析手段，目前已滲透到生物學的各個領域，其主要流程包括載體構建→表達鑒定→蛋白純化三個步驟。載體構建過程中，合適的標簽蛋白可直接影響后續蛋白的表達與純化，本心法主要針對 Flag 標簽蛋白！
知己知彼，才能百戰百勝。要想成功的將 Flag 標簽蛋白純化下來，肯定需要了解Flag 標簽蛋白是什么啦
Flag 標簽蛋白為編碼 8 個氨基酸的親水性多肽 (DYKDDDDK)，可通過基因工程技術加到目的蛋白末端。形成的融合蛋白可以直接進行 Flag 親和層析，也可以被抗 Flag 的抗體識別，也可使用腸激酶將 Flag 標簽切除后得到特異性目的蛋白，因此 Flag 標簽蛋白已廣泛用于蛋白表達、純化及功能研究等相關領域。
本心法中的 Anti-Flag Affinity Gel 是由高質量的鼠源 lgG2b 單克隆抗體與瓊脂糖 Sepharose 4B 共價偶聯而得，具有較高的 Flag 標簽蛋白結合容量，可用于細菌和哺乳動物細胞裂解物以及體外表達系統中 Flag 標簽蛋白的免疫沉淀、蛋白純化實驗。
圖 3. Anti-Flag Affinity Gel 的組成成分
圖 4. Anti-Flag Affinity Gel 的使用步驟 (僅供參考)
■ 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒 (Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit)
熒光素酶是自然界中能夠產生生物熒光的酶的總稱，可催化熒光素氧化成氧化熒光素，并在此過程中發出生物熒光，可用熒光測定儀測定。這一反應體系廣泛用于啟動子轉錄活性調控和 miRNA 靶基因驗證等方面的研究。
目前最常見的熒光素酶是螢火蟲熒光素酶 (Firefly luciferase) 和海腎熒光素酶 (Renilla luciferase)，前者用于熒光素酶報告基因的檢測，后者則作為內參，消除細胞生長狀態、數量、轉染效率等差異的影響，使結果更準確。
本心法中的 Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高純度的 D-熒光素、腔腸素以及比例優化的反應緩沖液，可實現哺乳動物細胞雙螢光素酶報告基因檢測，操作簡單、檢測快捷、靈敏度高。
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高效低毒、操作簡便、重復性好的轉染試劑盒。可高效地對 DNA、RNA進行轉染。對多種常見細胞具有高水平轉染效率，對原代細胞和難轉染細胞也具有較好的效果。 |
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是一種純化的小鼠 IgG2b 單克隆抗體，共價連接瓊脂糖 Sepharose 4B。可用于大腸桿菌、酵母、昆蟲和哺乳動物表達系統中表達的Flag標記蛋白的高效純化或免疫沉淀 (IP)。 |
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Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit 含有高純度的 D-熒光素、腔腸素以及比例優化的反應緩沖液，實現哺乳動物細胞雙螢光素酶報告基因檢測。 |
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