Overview
白皮書《采用活細胞分析系統最大限度地洞察細胞生長》展示如何利用Incucyte系統的活細胞分析能力更快、更深入、更高通量地提供對生物學事件的新見解,從細胞凋亡、免疫細胞殺傷、神經突生長和吞噬作用,到3D 腫瘤球生長和活性等各種應用場景。
這為研究人員提供了實驗設計新方法,用來解決之前無法解決的問題。活細胞分析監測細胞行為隨著時間的變化,增加了動力學測量數據的潛力,而不再受單一時間點終點分析的影響,簡化了各種應用的實驗操作流程,包括細胞健康和活性、免疫學和免疫腫瘤學、細胞療法和神經科學。
Incucyte® 活細胞分析系統
可以預見,隨著人工智能和機器學習能力的不斷增強,未來將有可能在細胞層面實現更深入的理解。使用活細胞分析系統,任何用戶都可以動態地了解其細胞模型的健康、形態、運動和功能,并能夠實時、全天候地對細胞類型特異性和時間依賴性的生物活動進行分析。至關重要的是,Incucyte獨特的技術結合細胞非干擾試劑,可確保細胞培養不受外界影響,并獲取高質量的結果。
無標記分析
- 相差成像
該方法最適合在2D模型中對細胞生長和形態進行測量;Incucyte采用專有技術獲取高清的相差圖像,確保得到細胞增殖定量的可靠結果。
- 明場成像
采用活細胞分析成像可直觀地監測球體大小隨著時間的變化,而不會破壞組織培養物,并有助于了解有絲分裂過程中細胞生物量的積累。與2D 單層模型相比,這些3D 細胞模型更能代表和預測體內條件,可提供更多體內相關性和轉化性的觀察結果。
細胞熒光標記
- 單獨細胞的標記
熒光標記可有力地驗證之前所述的無標記技術,反之亦然,無標記技術對于確認潛在的熒光探針是否對細胞無干擾,并優化細胞培養的實驗至關重要。
- 混合培養物中的細胞標記
活細胞ICC可用于識別混合培養中的特定細胞群,使人們對細胞過程(如細胞生長)有更深入的了解。
- 復雜共培養
活細胞分析系統可以獲得比以往更多的細節,產生有價值的縱向數據,以了解細胞之間的相互作用和過程,例如免疫細胞激活和免疫細胞殺傷腫瘤。
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無標記細胞增殖的動力學分析——將MDA-MB-231(A&B)或A549(C&D)細胞以不同密度接種在96孔板中,采集圖像,并用Incucyte®活細胞分析系統對其進行分析,通過basic模塊分析計算匯合度(A&B)或cell-by-cell模塊分析計數細胞(C&D)。圖像顯示了匯合度mask(A)或cell-by-cell mask(C),曲線(B&D)顯示了細胞隨著時間變化的增殖情況。數據顯示為4個孔的均值± SEM。
3D 結構的明場成像。示例顯示了MDA-MB-231 細胞形成的單球體明場圖像,A549 細胞作為多球體培養物接種在Matrigel™ 上,以及嵌入在Matrigel 膠滴中的小鼠胰腺類器官。mask 以黃色顯示,以用來定量細胞增殖隨時間的變化。定量結果如曲線圖所示。
在共培養前熒光標記細胞。將相同數量的AU565-Nuclight green 細胞和MDA-MB-231-Nuclight Near IR 細胞接種到96 孔板中,并用谷氨酰胺酶抑制劑CB-839(1 μM)處理。之前已經證明三陰性細胞(例如MDA-MB-231)對這種化合物敏感。使用Incucyte 活細胞分析系統中,持續四天采集相差和熒光圖像。綠色和Near IR 熒光(A)的圖像顯示,在正常情況下,兩種細胞類型均會增殖,而在CB-839 情況下,Near IR 細胞明顯減少。隨著時間進展,AU565 細胞生長受到極輕微的影響(B),而MDA-MB-231 細胞增殖明顯受到抑制(C)。此外還發現,與MDA-MB-231 細胞相比,AU565細胞生長速率較慢。