樣本收集手冊之植物類樣本的收集方法及注意事項
1.葉片、莖、花
- 樣品量要求：
GC-MS，LC-MS 實驗：200mg/sample。
頂空 GC-MS 實驗：2g/sample。
- 樣本收集步驟：
取整片葉片/一段莖/一朵花，用錫箔紙包裹并標記后，迅速放入液氮中冷凍處理至少 15min。取出后迅速放入自封袋中（每組一袋），在自封袋中放入標簽紙注明樣本信息。迅速放入-80℃冰箱凍存。足量干冰寄送。
- 注意事項：
1. 采集葉片樣本時，最好在中午光照好的時間收集。
2. 要根據實驗設計，采集樣本時保持樣本一致性，尤其是同一組樣本（顏色、衰老程度、葉脈占比、光照、位置等）。
3. 由于錫箔紙上 marker 筆標記容易模糊，所以需要在自封袋中放入標簽紙注明。
2.根
- 樣品量要求：
GC-MS，LC-MS 實驗：500mg/sample。
頂空 GC-MS 實驗：3g/sample。
- 樣本收集步驟：
1. 取整株植物的根部，迅速用 1×PBS 漂洗掉根上的泥土。
2. 根據具體實驗設計取植株根特定的部位，500 mg/sample 裝入離心管中。
3. 標號后迅速放入液氮中冷凍處理至少 15min。
4. -80 度凍存；足量干冰寄送。
- 注意事項：
1. PBS 漂洗時間要盡快。
2. 由于根部組織特別脆弱，被擠壓后會變成漿糊狀，所以推薦保存至離心管中，而不是錫箔紙包裹。
3.果實、種子
- 樣品量要求：
GC-MS，LC-MS 實驗：200~500mg/sample。
頂空 GC-MS 實驗：3g/sample。
- 樣本收集步驟：
1. 對于含多汁、塊頭較大的果實（番茄、西瓜、蘋果等）需要先用鋒利的刀分割成“均勻”合適的小塊（≈200 mg/sample）分裝至 2mL 離心管中，標號后迅速放入液氮中冷凍處理至少 15min。
2. 對于細小的顆粒種子（擬南芥種子、谷物種子等），可以先將同一組的植株種子混勻后再分裝（≈200 mg/sample）至 1.5mL 離心管中。標號后迅速放入液氮中冷凍處理至少 15min。
3. 對于要求對整個果實進行提取的（整粒葡萄等），需要把果實裝在 50mL 離心管中/自封袋中，標號后（同時放入自封袋中標簽紙，注明樣本信息）迅速放入液氮中冷凍處理至少 15min。
- 注意事項：
對多汁的果實進行取樣很難保持均一性（如番茄，皮、果肉、果瓤、籽的占比）， 強烈建議將整個果實進行研磨、凍干，對粉末進行稱重分裝。
收集方法參考文獻：
[1] De Vos R C, Moco S, Lommen A, et al. Untargeted large-scale plant metabolomics using liquid chromatography coupled to mass spectrometry.[J]. Nature Protocols, 2007, 2(4):778-791.
[2] Kim H K, Choi Y H, Verpoorte R. NMR-based metabolomic analysis of plants[J].Nature Protocols, 2010, 5(3):536-49.
最后附上我司協助客戶發表的植物樣本部分文獻，以便各位老師、同學在設計課題、文章撰寫等環節可參閱和引用。
