疫情期間，在各類新型冠狀病毒檢測方法中，咽拭子-試劑盒檢測因其操作方便、不需要其他設備，成本相對較低，是目前最主要的檢測方法。對于樣本的核酸檢測，常見有手工和全自動工作站，相對手動，工作站效率更高，更適合多樣本。以下我們將簡單介紹一下檢測流程，在此過程中，耐思可以提供哪些在耗材方面的協助，讓大家更直觀的了解耐思的產品。

 樣本的采集

“巧婦難為無米之炊”，樣本采集是所有檢測的第一步。疫情爆發后，耐思快速研發出一次性樣品采集器，成功取得相關醫療資質，并迅速投入生產，保障前線所需。
 

 

一次性使用采樣器
 

該產品可用于新冠肺炎的口咽樣品采集，醫院、疾控中心等單位需求量大，目前NEST一次性采樣器已取得相關醫療資質并投入生產，庫存充足，物流迅速，如有需求可聯系耐思銷售咨詢購買。

試劑盒核酸檢測流程

對于新冠病毒的核酸檢測步驟，參考了北京協和醫院感染內科韓揚副研究員發表的流程解析，向奮戰在一線的醫護人員致敬！

1、樣本的滅活處理

兩名完成三級防護的工作人員，進入樣本處理區或樣本處理專用實驗室，將接收到的樣本二級包裝在安全柜內打開，檢查樣本主容器是否為嚴格密閉；對密封袋表面進行消毒后，對送檢樣本進行56℃下30分鐘的滅活，滅活后的樣本管需在生物安全柜內打開最內層的容器，將拭子保存液混勻后進行分裝和用于核酸提取。

2、手工核酸提取操作流程（以科智達恒溫熒光檢測法試劑盒為例）
（1）試劑配制 (在試劑準備區進行)

在基因擴增實驗室的試劑配制區或單獨的普通試劑配制實驗室中，將試劑盒中所需組分解凍，振蕩混勻并短暫離心后備用。根據所檢測的樣本數量按照：緩沖液21.9μL，DNA聚合酶1μL，AMV逆轉錄酶0.1μL配制反應液，建議每次檢測均設置陰性對照和陽性對照。將配制好的反應體系混勻后，按23μL量分裝到PCR 反應管，轉移至樣本處理區。
 

（2）加樣（樣本處理區）

分別向不同管中加入2μL的陰性對照、樣本核酸提取液、陽性對照，終體積為25 μL/管，再分別加入25μL密封液，蓋緊反應管，瞬時低速離心，轉移至檢測區，以備PCR檢測使用。
 

 

NEST 微量離心管系列
 

NEST 吸頭系列
 

NEST 高速離心機
 

（3）采用核酸提取儀提取核酸的操作流程

因為不同品牌的工作站不同，所以沒有很統一的操作方法，根據核酸提取儀和試劑的說明書準備好提取試劑，并按照要求回收提取好的核酸備用。今天我們就選取市面上常用的幾款工作站為例，介紹一下耐思可以提供哪些產品。自動工作站用的最多的，莫過于吸頭，耐思除了常規吸頭外，我們又推出了新品導電吸頭。
 

 

 

  

深孔板系列，可以結合排槍、高通量自動液體操作儀器和軟件，實現對生物樣品的高通量操作。
 

（4）PCR體系的配制、模板加樣及上機

在基因擴增實驗室的試劑配制區或單獨的專用實驗室，配制PCR體系。根據試劑盒說明書的要求，將試劑盒的不同組分（一般包括反應液、酶、引物等）按照各自必須的體積量進行配制混合，充分混勻并離心后，通過傳遞窗傳遞到核酸提取和加樣區，或由專人從試劑配制實驗室送至核酸提取和加樣專用實驗室。在加樣專用生物安全柜內，根據檢測樣本例數分裝體系到每個反應管中，逐一將樣本核酸加入到對應的反應管中，并加蓋密閉好PCR反應管；每批次檢測需要做一個陽性對照和3個陰性對照。
 

 

PCR 八連管系列
 

PCR 單管
 

在擴增區或專用擴增實驗室，由專人取出配制好的PCR檢測管，混勻、離心后，小心上機檢測，按照試劑盒說明書設置擴增參數并分析判讀結果。進行結果分析時，應認真閱讀試劑盒說明書，在了解該試劑盒的靈敏度、檢測方法和局限性等技術特點的基礎上，結合該批次陰性質控的結果，綜合判讀樣本的檢測結果。檢測結束后，為防止可能的擴增污染，擴增結束后的PCR管嚴禁開蓋或帶離擴增實驗室，應盡快通過可密封塑料袋等容器盛裝密閉后，放入指定專用醫療垃圾桶中做進一步處理。
 

 

八連管蓋
 

（5）全自動核酸檢測儀

此類檢測集樣本加載、核酸提取、PCR體系構建等諸多功能于一體，可實現全流程自動化操作，徹底將您從繁瑣的手動操作中解放出來。
 

 

其他品牌核酸工作站，需要適配各類PCR耗材，如0.1ml和0.2ml八連管、96孔板等。
 

 

（6）廢棄物的處理

對檢測完成后的疑似病人樣本采用雙層塑料袋密封；對實驗過程中產生的廢液和槍頭等置于含0.5%～1%有效氯的含氯消毒液的廢液缸。上述物品經壓力蒸汽滅菌處理。詳見《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南》（第三版）。

重要提醒：鑒于2019新型冠狀病毒具有高度傳染性，檢驗人員應在二級生物安全環境進行檢測，個人防護按照三級生物安全要求。為避免人員感染、實驗交叉污染及陽性品氣溶膠污染，建議將以上設備放入生物安全柜中并全程在生物安全柜中進行實驗操作，同時建議條件允許的情況下可對所采集樣本進行56℃ 30min滅活處理后進行核酸提取和后續檢測。

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