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樂研化學薄層層析硅膠板使用說明

瀏覽次數:3018 發布日期:2019-7-26  來源:上海皓鴻生物醫藥科技有限公司

樂研化學薄層層析硅膠板涂層的主要成分為SiO2.nH2O,化學性質穩定,除強堿和氫氟酸外,不與其他酸堿反應。具有分離效果好,塔板數高,點樣斑點小,分離時間短,靈敏度高,斑點清晰,不擴散等特點;適用于醫藥,化工,生化,環保等系統的科研和檢測;對于某些微量以及成分復雜的化合物有很好的分離效果,適用于定性和半定量分析。

經典操作和注意事項:
1、點樣
分析板:
點樣一般為圓點(不能太大),點樣基線距底邊0.5~1.0 cm,點樣直徑為1~2 mm,點間距離約為0.5~1.0 cm,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜;

注意事項:
(1)配制樣品溶液時應選用對組分溶解度較好的溶劑;溶劑的粘度不宜過高,以便于點樣;溶劑的沸點要適中,沸點過低,樣品溶液中溶劑易揮發,會改變溶液濃度導致較大誤差。沸點過高,會使樣品溶液的溶劑殘留于原點,導致展開劑極性異常變化,最常用的溶劑為甲醇;
(2)點樣時要控制力度,避免損傷涂層表面;
(3)點樣后必須待溶劑揮發完全后,再進行展開,但要避免長時間高溫加熱,以免改變待測組分的性質。

制備板:
取一塊制備板,在距離底部2~3 cm處用鉛筆畫一條直線;取一次性滴管,在吸管口處嵌入適量脫脂棉后吸入待分離樣品溶液,沿著制備板上的基線均勻移動,然后用吹風機吹干,反復操作,直至上樣完成;將制備板置于展開缸中,硅膠面背對展缸玻璃面;展開結束后,取出、晾干,在紫外燈下面用鉛筆標出所需的色帶,用刮刀刮下,選擇大極性溶劑,浸泡攪拌1~2小時,過濾、洗滌、旋干即可。

注意事項:
(1) 待分離的樣品必須在硅膠中穩定;且難溶性樣品不適合此方法;
(2)上樣量的計算方法:1 mm厚的硅膠板的負載量不要超過5 mg/cm3。以20*20 cm,厚度為1 mm厚硅膠板為例:若上樣帶寬是0.5 cm,板子兩邊空出0.5 cm邊際,上樣量約為0.5*19*5=47.5 mg,以此類推;
(3)基線必須保持在展開劑的液面以上,防止待分離樣品溶于展開劑;
(4)為保證溶出效率,需將刮下的硅膠碾碎。安全起見,操作者應帶口罩,在風速小的環境下進行;
(5)浸泡硅膠常用的溶劑是二氯甲烷/甲醇:20/1~10/1,注意不能超過這個比例,否則硅膠中的部分物質會被溶解;
(6)制備板展開前后,所有使用的容器都要確保干凈,盡量避免使用真空油脂;

2、展開劑
(1)化合物分離效率大小用Rf(化合物距離基線的距離除以溶劑的前沿距基線的距離)值表達,Rf值最好在0.15~0.85之間,盡量控制主要物質Rf值在0.3~0.7之間,Rf值與展開劑的相對極性有密切關系。其中常用溶劑的極性順序如下:水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>三氯甲烷>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環己烷>己烷>煤油(最小);
(2)展開劑的選擇:單一的溶劑往往不能達到很好的分離效果,正常使用混合溶劑即高極性與低極性組成的混合體系(不限于2種,有可能是3種以上,根據底物的性質決定),常用的溶劑組合有:石油醚/乙酸乙酯、二氯甲烷/甲醇、石油醚/丙酮、石油醚/二氯甲烷、乙酸乙酯/甲醇、乙酸乙酯/四氫呋喃、氯仿/乙酸乙酯、乙腈/水等,具體比例要結合實際情況,或參考文獻中報道的展開劑配比;
(3) 薄層層析硅膠板展開過程中部分樣品會有拖尾現象,主要是因為樣品具有酸或堿的化學成分,且部分在溶液中電離,展開時存在分子,離子兩種狀態,主要解決方法是:若樣品酸性比較大,一般在展開劑中加酸(0.1%~0.5%甲酸,乙酸);若樣品堿性比較大,一般在展開劑中加堿(0.1%~0.5%氨水,三乙胺)。

3、展開室
薄層展開室需預先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂的蓋,使系統平衡。將點好樣品的薄層層析硅膠板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,待展開至規定距離,取出薄層板,晾干,并進行后續的檢驗。

4、常用顯色劑及其配制方法


5、儲存與活化
薄層層析硅膠板具有很強的吸濕性,應存放于密封干燥處,請勿與易揮發性物質一起存放。拆封后未用完的硅膠板應立刻密封,以免吸潮或吸附其他化學物質而影響分離性能;若硅膠板吸潮,可活化后再使用(放置于110oC的烘箱中,烘30分鐘)

6、安全防護措施
薄層層析硅膠板的使用中需要全程帶手套,若不小心被玻璃板劃傷,可參考如下方式做緊急處理:
(1)若傷口不大不深,出血不多,傷口干凈,可用酒精消毒傷口周圍,不要將消毒液弄進傷口內,待干后用消毒紗布覆蓋包扎,或用創可貼粘貼;
(2)若傷口不干凈,要先用碘酒沿周圍皮膚消毒一次,再用酒精消毒兩次,然后用少量生理鹽水沖洗傷口,沖洗時用藥棉輕輕擦拭傷口,去除異物,最后再對傷口周圍的皮膚進行再一次消毒,并用紗布覆蓋包扎;
(3)若傷口較深,接觸到化合物,還須速去醫院,進行專業的醫護處理,必要時注射破傷風育苗。

發布者:上海皓鴻生物醫藥科技有限公司
聯系電話:400-8210-725
E-mail:product@leyan.com

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