PART 1/二氧化碳培養箱消毒

二氧化碳培養箱中的微生物往往會對培養的結果產生一定的影響，常見的微生物處理方式包括物理過濾和滅菌，下面讓我們一起來探討兩種方式。

1.1 物理過濾  將箱體內氣體通過過濾器循環，使箱體內氣體潔凈度達到一定的級別(常見UPLA過濾器為1級、HEPA 過濾器為 100 級)；主要作用是保持箱體內潔凈度，保證培養箱體內的環境，但對微生物及病毒不起到任何的殺滅作用，僅僅是將箱體內的微生物過濾到過濾器內，這樣需要對過濾器進行定期更換，采用物理過濾的培養箱更適合于環境條件較好的實驗室。

1.2 滅菌  殺滅或清除傳播媒介上的微生物(包括芽胞)，使之達到無菌程度。經過滅菌的物品稱“無菌物品”，培養箱內的無菌處理是指殺滅所謂微生物、病毒等，徹底避免環境對樣本的影響，以及消除不同樣本之間的交叉污染。根據不同的去除對象以及應用環境需求，采用有效的方法。

1.2.1 微生物分類

根據微生物的抵抗能力不同，可將微生物分為如下幾類：

① 細菌繁殖體  易被一般的消毒劑殺滅，一般革藍氏陽性細菌對消毒劑較敏感，采用化學消毒效果較為明顯； 革藍氏陰性桿菌則常有較強的抵抗力，一般的化學消毒效果不明顯，但對熱敏感，采用熱力學方法效果明顯。

② 細菌芽孢和真菌芽胞  有厚厚的孢子壁，對化學消毒劑有較強的抵抗力，一般的化學消毒對芽孢效力有限；消毒能力強的化學試劑對芽孢有一定的殺滅作用，但對濃度、處理方法等要求嚴格；常見的方法是采用熱力學方法。

③ 病毒  種類較多，不同病毒種類對外界的抵抗能力不同，化學試劑消毒的效果也不相同，RNA活性受溫度影響明顯，一般采用熱力學方法去除。

④ 真菌  普遍對環境抵抗能力強，一般的紫外消毒方式和化學試劑消毒達不到預期的效果，通常采用熱力學方法處理，煮沸或使用高壓滅菌燈。

1.2.2 熱力學滅菌方法

培養箱內常見的熱力學滅菌方法包括干熱滅菌和濕熱滅菌。

①干熱滅菌 將箱體內加熱到120℃以上，濕度為20% 以內，持續一定的時間，通過高溫使蛋白質及核酸變性失活，達到殺滅的目的。有些真菌芽孢，由于厚厚的細胞壁保護，能夠抵抗一定的高溫，滅菌不能徹底。

②濕熱滅菌 在高溫的同時保持箱體內飽和濕度，達到徹底滅菌效果。
 

濕熱滅菌相比于干熱滅菌，主要優點是：

①濕熱滅菌中的菌體吸收水分，蛋白質含水量增高，所需凝固溫度降低，易凝固變性；

②高溫水蒸汽對蛋白質有極高的穿透力，從而加速蛋白質變性而迅速死亡；

③蒸汽有潛熱存在，能迅速提高菌體的溫度，從而增加滅菌效力。

由此可見，培養箱采用濕熱滅菌是一種可行且效果極佳的滅菌方法，能徹底消滅細菌、真菌、孢子、病毒等微生物且沒有二次污染。一個季度采用一次高溫滅菌，消除潛在的污染風險。

PART 2/二氧化碳培養箱維護

居安思危，防患于未然，是智者避免災禍的良方，是降低損失的措施。二氧化碳培養箱的日常維護就是良方，做好以下幾個方面可以大大降低污染的概率:

2.1  重視管理  安全為目的，實驗室內的工作人員應明白自身的態度和人為因素對實驗環境的重要性。定期對系統進行校正，至少每年一次。各項數值一旦固定后，不要隨意調節，以免影響箱內溫度、濕度、CO2濃度的波動，降低機器的靈敏度，同時還會影響培養箱內的細胞生產狀態。

2.2  規范操作  必須穿著實驗服，換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實驗操作時必須配帶一次性手套，特別是打開培養箱前，必須先用75%的酒精噴洗雙手，再取出培養箱中的細胞培養瓶或培養板。顯微鏡下查看細胞培養瓶或培養板后，再放回培養箱時，同樣也要先噴酒精消毒。培養箱的兩個門開關取（放）物要迅速，否則會影響CO₂的濃度、溫度和濕度，造成污染。切記開門時不要對著培養箱說活，大口呼吸甚至是打噴嚏。

2.3  清潔  去除灰塵、污垢和有機污漬。粉塵、污物以及有機物是微生物的棲身之所，并可能影響除污染劑（抗菌劑、化學殺菌劑以及消毒劑）的作用，必須先經過清潔才能實現消毒和滅菌的目的。

2.4  消毒抑菌  醫用酒精可以很好地起到消毒作用，日常可使用75%的酒精對培養箱主體和內部進行擦拭，一個月一次即可。培養箱內部可以放置2%~10%的硫酸銅溶液，硫酸銅溶液具有一定的殺菌抑菌效果。

以上就是本次“二氧化碳培養箱消毒及日常維護”小課堂全部內容，知識點已經用紅字標出，請時常翻開本篇內容溫故知新。