紅細(xì)胞裂解液（RBC Lysis Buffer,10×）

簡(jiǎn)介

在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞。去除紅細(xì)胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液、Gey＇s Lysis Buffer。紅細(xì)胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer）是一種從人、鼠或其他哺乳動(dòng)物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液，其主要有效成分為NH4CI。

RBC Lysis Buffer(10×)配方經(jīng)過優(yōu)化不同于ACK Lysis Buffer，在裂解無核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞（Lymphocyte）或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。對(duì)于裂解、去除有細(xì)胞核紅細(xì)胞，例如鳥或禽類的紅細(xì)胞，效果不佳，裂解類似細(xì)胞時(shí)，不建議采用。該裂解經(jīng)過濾除菌，為10×的濃縮液，使用1×RBC Lysis Buffer處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)，尤其適用于流式細(xì)胞檢測(cè)或需要高濃度裂解液的情況。

組成：

自備材料：

1. 胰蛋白酶
2. 離心機(jī)
3. PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液

操作步驟（僅供參考）：

注意：絕大多數(shù)情況下，應(yīng)使用無菌去離子水稀釋RBC Lysis Buffer（10×）至1×使用，流式細(xì)胞術(shù)除外。

• 組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1. 制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2. 裂解：加入3~5倍細(xì)胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1~2min。

本操作步驟在4。C條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

1. 離心：4。C，400~500g離心5 min，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
2. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。
3. 洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4。C，400~500g離心2~3 min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
4. 如有必要，重復(fù)上述步驟5一次，共洗滌1~2次。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

• 組織細(xì)胞樣本的快速操作（無需洗滌）

1. 制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2. 裂解：加入細(xì)胞5倍細(xì)胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1~2 min。本操作步驟在4。C條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3. 加入15~20 ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
4. 離心：4。C，400~500g離心5 min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。
5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2~3各一次。
6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

• 血液樣本的常規(guī)操作

1. 取新鮮抗凝血，400~500 g離心5 min，棄上清。
2. 裂解：加入6~10倍細(xì)胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解1~5min。

本操作步驟在4。C條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解1~2 min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至4~5 min，并且裂解過程中輕輕搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。）

1. 離心：4。C，400~500g離心5 min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。
2. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
3. 洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4。C，400~500g離心2~3 min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
4. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意：對(duì)于微量或少量的血液樣本，可以不用第一步操作，可直接加入10倍血液體積的ACK Lysis Buffer進(jìn)行第2步操作，并在4。C或室溫裂解4~15 min。對(duì)于鼠的血液，裂解4~5 min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10 min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

• 血液樣本的快速操作（無需洗滌）

1. 新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×RBC Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解4~5 min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10 min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。）
2. 加入20~30 ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
3. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
4. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，不一定要制備成單細(xì)胞懸液。
2. 后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無菌操作，盡量在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。
3. 離心步驟盡量在4。C離心機(jī)上操作。
4. 常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可心節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。
5. 離心洗滌后，通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)。
6. 如果經(jīng)過1×RBC Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細(xì)胞時(shí)不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。
7. 為了您的安全各健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12個(gè)月有效。                                                                      

如實(shí)驗(yàn)中遇到相關(guān)技術(shù)問題，請(qǐng)及時(shí)咨詢公司技術(shù)人員