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用于生產MSCs的大鼠骨髓原代培養

瀏覽次數:1900 發布日期:2010-11-30  來源:www.pricells.com.cn

用于生產MSCs的大鼠骨髓原代培養

試劑和材料:
1. 完全培養基(CCM):α-MEM:α-低限量基礎培養基,含谷氨酰胺,無核苷酸或脫氧核苷酸;添加:20%附加L-谷氨酰胺 2mmol/L、經FBS雜交瘤純化,非熱滅活、青霉素100U/ml、鏈霉素100μg/ml。含0.2μg/ml兩性霉素B。過濾除菌。儲存于4℃,不超過2周;
2. PBSA;
3. 塑料組織培養Petri培養皿,15cm直徑;
4. 聚丙烯離心管,15ml和50ml;
5. 0.85%臺盼藍鹽溶液;
6. 改良的Neubauer血細胞計數器;
7. Eppendorf 5417C微量離心器或同等設備;

實驗方法:
1. 從一根股骨所得的骨髓懸液中取出10μl,與10μl臺盼藍混合,評估存活率,確保高于80%;
2. 1000g離心10min沉淀骨髓;
3. 用25ml預熱的含抗真菌藥物的CCM重懸骨髓(處理大鼠骨髓細胞使用抗真菌藥物,人骨髓細胞不使用);
4. 將25ml細胞懸液加入到15ml直徑的組織培養板中,37℃,5%CO2環境下至少孵育15h;
5. 從培養箱中取出培養板,吸出培養基;
6. 用20ml預熱的PBSA潤洗單層細胞。重復潤洗過程3次,將最后的洗滌產物加入30ml預熱的含抗菌藥物的新鮮CCM中(只有大鼠細胞使用抗真菌藥物);
7. 如有需要每隔兩天重復步驟6,維持6—14天;
8. 每3天用倒置顯微鏡觀察單層細胞。貼壁、成纖維細胞樣的MSCs集落可以在培養板中清洗可見。某些情況下,這可能是造成細胞污染的信號,但這些細胞隨著細胞傳代過程可被去除。當培養物達到40%—50%匯合時,按照MSCs自我更新的集落形成單位測定的方法處理細胞。這些MSCs標記為0代;

發布者:武漢原生原代生物醫藥科技有限公司
聯系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

標簽: 原代細胞
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