E. coli具有遺傳背景清晰、細胞增殖快、成本低、表達量高、穩(wěn)定性好和抗污染能力強等特點，適用于多種蛋白的表達。大腸桿菌蛋白表達系統(tǒng)是目前應用廣泛且經(jīng)濟實惠的蛋白表達系統(tǒng)。缺點是該表達系統(tǒng)易形成包涵體，含有內(nèi)毒素，沒有翻譯后修飾的加工功能。該系統(tǒng)適用于表達原核來源的蛋白或不需要翻譯后修飾的真核來源蛋白，特別是小分子蛋白。

藍景科信擁有豐富的E. coli蛋白表達純化經(jīng)驗，熟練運用多種表達宿主菌，提供多種表達載體和標簽的選擇。

優(yōu)勢：

遺傳背景清晰、細胞增殖快；成本低、表達量高、穩(wěn)定性好；抗污染能力強；
 

原核E.coli蛋白表達服務內(nèi)容
步驟	內(nèi)容	交付內(nèi)容	周期
密碼子優(yōu)化及基因合成	客戶提供目的蛋白對應的CDS序列信息或質(zhì)粒		1-2周
載體構建	克隆至合適的表達載體 質(zhì)粒測序 質(zhì)粒制備	測序結果	1-2周
表達鑒定	10 mL小量表達 3種表達條件嘗試 蛋白表達評估(SDS-PAGE)	表達評估報告	1-2周
大量表達和純化	蛋白純化(可溶表達) 蛋白變性復性純化 (包涵體) QC分析(SDS-PAGE)	1-3 mg純化蛋白，純度>85%	1-2周
工業(yè)級表達及純化（可選）	放大培養(yǎng)（根據(jù)具體需求量） 親和純化 純化蛋白檢	蛋白純度鑒定報告 成品蛋白	根據(jù)表達體積商定

表達案例：

 

M：Molecular weight marker

S：Supernatant of cell lysate

P：Precipitation of cell lysate

FT：Flow through

W1：Wash 1

W2：Wash 2

W3：Wash 3

E：Elution from Ni-NTA

技術服務：
1、DAP-seq：高通量檢測轉(zhuǎn)錄因子或DNA結合蛋白在基因組上的結合位點。
2、酵母單雜交：研究蛋白質(zhì)和特定DNA序列相互作用。
3、酵母雙雜交：檢測已知蛋白質(zhì)之間的相互作用，鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白。
4、EMSA：鑒定或驗證DNA結合蛋白和DNA序列的相互作用。
5、ChIP-seq：高效檢測重組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子在基因組的結合位點。
6、DAP-seq與RNA-seq聯(lián)合分析： 分析轉(zhuǎn)錄因子的靶基因在RNA-seq數(shù)據(jù)中的表達變化，深入挖掘DAP-seq和RNA-seq測序數(shù)據(jù)，增加轉(zhuǎn)錄組測序的分析深度。
7、DNA-pull down：鑒定與DNA結合的蛋白。
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