自然界中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)大小從5kDa到400kDa不等。蛋白質(zhì)水解過程將蛋白質(zhì)切成較短片段，即肽段，蛋白質(zhì)水解是肽質(zhì)譜鑒定分析之前至關(guān)重要的一步，是蛋白質(zhì)鑒定和表征、生物標記物的發(fā)現(xiàn)成功進行的基礎(chǔ)。盡管質(zhì)譜可以研究完整的蛋白質(zhì)，但是較小的肽更容易進行蛋白質(zhì)鑒定。且可提高蛋白質(zhì)的覆蓋率，因為蛋白質(zhì)覆蓋率由于溶解性和異質(zhì)性可能會降低。因此，最常見的蛋白質(zhì)組學方法往往會利用位點特異性酶切位點來產(chǎn)生較小的多肽片段。質(zhì)量較小的肽段更容易通過高效液相色譜（HPLC）和HPLC偶聯(lián)質(zhì)譜進行分離和表征。

百泰派克基于質(zhì)譜的蛋白鑒定示例

百泰派克生物科技提供兩種水解蛋白質(zhì)的方法：（1）凝膠內(nèi)水解（聚丙烯酰胺凝膠基質(zhì)中的蛋白質(zhì)水解）；（2）溶液內(nèi)水解（蛋白質(zhì)在氯仿/甲醇中沉淀，然后在尿素中再溶解后進行）。通過一維或二維凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，可直接在凝膠內(nèi)進行水解，凝膠內(nèi)水解，有效且可重現(xiàn)好，但比較費力費時。相較于凝膠內(nèi)水解，溶液內(nèi)水解方法更省力，所需的時間較少，但溶液內(nèi)水解的蛋白，蛋白的再溶解度低，可能會導致一定的樣品損失。

百泰派克生物科技可同時提供凝膠內(nèi)水解和溶液內(nèi)水解兩種蛋白質(zhì)水解相關(guān)服務。蛋白質(zhì)水解的工作流程包括：

1. 制備裂解液；
2. 溶液內(nèi)或凝膠內(nèi)進行酶切;
3. 使用離液劑（如尿素和胍）使蛋白質(zhì)變性；
4. 使用DTT還原二硫鍵；
5. 使用碘乙酸或碘乙酰胺將半胱氨酸烷基化；
6. 去除試劑和交換緩沖液；
7. 在適當?shù)膒H和溫度下，用胰蛋白酶或其他蛋白酶在碳酸氫銨緩沖液中過夜變性約18小時；
8. 加入酸類物質(zhì)終止酶切。
9. 蛋白質(zhì)富集/清洗。

樣品要求

百泰派克生物科技可處理各種類型的樣本，包括但不限于：

天然來源的蛋白質(zhì)；
重組來源的融合蛋白和標記蛋白；
不同亞型的抗體；
膜蛋白及其他。

• 靈活性：我們提供凝膠內(nèi)和溶液內(nèi)水解兩種蛋白質(zhì)水解策略；
• 高準確性和覆蓋范圍：我們的水解服務可以大大提高質(zhì)譜分析的準確性和覆蓋范圍。
• 應用廣泛：可促進蛋白質(zhì)的鑒定和表征，發(fā)現(xiàn)疾病的生物標志物，并有助于理解生物學過程。
• 完整的蛋白質(zhì)組學服務：我們提供完整的蛋白質(zhì)組學服務，涵蓋蛋白質(zhì)組學分析的整個過程，可對水解后的樣品進行分析測定，一站式為您解決組學問題。

百泰派克生物科技還提供高通量自動化蛋白質(zhì)水解服務，歡迎咨詢。