SITE-seq體外脫靶檢測

舒桐科技長期致力于基因編輯領域，其中也包括對脫靶檢測手段的大力研發。近年來，我們成功開發了GUIDE-pro體內脫靶檢測及SITE-pro體外脫靶檢測。SITE-pro是由舒桐公司基于SITE-seq體外脫靶檢測手段自主研發的高效、高敏感、高特異性、高通量的sgRNA脫靶檢測及篩選的方法。

SITE-seq原理如下：提取高分子量DNA，直接進行體外切割，加帶有生物素標記的接頭，DNA片段化，加上另外一端接頭，PCR擴增完成文庫構建。最后采用PE150策略進行測序。

SITE-seq原理及實驗流程
舒桐SITE-Pro優勢

1. 無需高分子量DNA，普通提取的DNA即可；
2. DNA需要量少，傳統的SITE-seq每個樣本至少需要的DNA為10ug，改造后的SITE-Pro僅需5ug就能完成實驗；
3. 不受物種限制，無論是植物還是動物都可進行檢測；
4. 可同時檢測多條sgRNA的在靶機脫靶，可用于大規模的sgRNA篩選；
5. 不僅能檢測SpCas9 的脫靶，還能檢測SaCas9，AsCpf1和LbCpf1的脫靶；
6. 脫靶位點相較于細胞內脫靶檢測，其覆蓋更加全面；
7. 服務周期短，從準備DNA到最終可視化結果呈現，僅需1月。

舒桐升級版SITE-Pro的應用場景

1. 高通量sgRNA篩選：
   設計多條sgRNA后，利用SITE-Pro篩選切割效果最高，或者脫靶最低的sgRNA；無需再進行傳統的耗時耗力的低通量篩選驗證；
2. 脫靶檢測：
   無論是植物還是動物，還是無法獲取大量DNA或者高分子量DNA（如石蠟切片/長期凍存的細胞），都可采取該方法進行脫靶檢測。另外，相較于體內脫靶檢測，覆蓋的脫靶位點更為全面。這對于基因治療極為重要；
3. 不僅適用于SpCas9，還適用于SaCas9，AsCpf1和LbCpf1等

實驗示例

舒桐醫療科技有限公司利用SITE-Pro對文獻常檢測的位點HEK293細胞系的site 1進行了脫靶檢測，找到了更多的脫靶位點。

服務內容 樣品要求

1. DNA樣品總量：10ug以上，濃度50ng/ul以上；
2. DNA樣品純度：OD260/280=1.8~2.0 ；
3. DNA樣品完整性：DNA無降解，需提供凝膠電泳檢測膠圖。

舒桐生物科技是一家主攻基因編輯的公司。已開發出多種具有自主知識產權的新型CRISPR基因編輯工具、掌握了各類精準的基因編輯技術（定點敲除、點突變、大片段插入、過表達等）、建立了安全高效的納米材料及病毒（慢病毒、腺病毒、腺相關病毒）遞送系統及高通量的sgRNA篩選平臺。同時，也是國內首家提供基因脫靶檢測服務的公司，致力于為科研機構及基因治療領域企業提供一體化服務。