隨著新版的新冠診療方案將原用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的托珠單抗用于新冠的免疫治療，同時有7個人源化單抗項目進(jìn)入新冠免疫治療臨床試驗階段（3個托珠單抗，2個PD1單抗，1個阿達(dá)木單抗，1個貝伐珠單抗），人源化單抗的創(chuàng)新運用又進(jìn)入了一片全新天地。截止2019年銷售額超60億美元的藥物單品中，人源化單抗產(chǎn)品約占54%。單克隆抗體以其高特異性和單一性的生物學(xué)功能，在治療腫瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反應(yīng)等多種疾病上發(fā)揮著強(qiáng)大的作用。在新藥研發(fā)和基礎(chǔ)科研領(lǐng)域，越來越多的重點項目也焦距在了人源化單抗的開發(fā)和拓展運用上。接下來，AbMole將通過2期原創(chuàng)性綜述為您展示各種人源化單抗在不同品系小鼠中體內(nèi)實驗的精華，希望以我們的專業(yè)精神為您鋪就通往成功的道路！

首先，我們先了解一下人源化單抗抑制劑動物試驗中常用到的不同品系的小鼠：

近交系小鼠

通過連續(xù)多代近親交配繁殖后獲得的基因高度純合化小鼠。常見的品系有：BALB/c（白色）和C57BL（黑色）。具有相對完整的鼠源免疫系統(tǒng)（如B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和NK淋巴細(xì)胞等），與鼠類移植腫瘤組織相容。如使用此類近交系小鼠進(jìn)行動物實驗，需確定所用人源化單抗抑制劑對鼠類對應(yīng)靶點可識別且有活性。

Nude小鼠

先天性胸腺缺陷的突變的體毛稀少小鼠，其免疫系統(tǒng)特征為：先天性無胸腺，缺少T細(xì)胞，T細(xì)胞功能明顯有喪失；但B細(xì)胞功能正常；NK細(xì)胞活力增強(qiáng)。是常用的異種移植動物（如永生化人腫瘤細(xì)胞的接種和生長）。

SCID小鼠

有自發(fā)重度聯(lián)合免疫缺陷突變的白化品系小鼠，由于該突變妨礙了T細(xì)胞和B細(xì)胞的發(fā)育和成熟，所以該品系小鼠的B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞功能聯(lián)合缺失，但卻擁有正常的NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等。是PDX（Patient-Derived tumor Xenograft，人源腫瘤異種移植）模型的良好宿主。

NOD-SCID小鼠

在SCID小鼠基礎(chǔ)上，與非肥胖性糖尿病小鼠（NOD/Lt）品系回交后得到的免疫缺陷型小鼠。除T和B淋巴細(xì)胞缺乏外，同時NK細(xì)胞的活性也很低，因此其較少發(fā)生免疫排斥反應(yīng)及移植物抗宿主病（GVHD）。

大家可以看出從近交系小鼠到NOD-SCID小鼠，其免疫水平是依次降低的。在NOD-SCID小鼠基礎(chǔ)之上，人們又進(jìn)一步構(gòu)建了人源化小鼠，用以模擬人體免疫細(xì)胞應(yīng)答的微環(huán)境和探索免疫系統(tǒng)與人類腫瘤細(xì)胞或組織之間的相互作用。

常見的人源化小鼠有如下2種：

a. CD34+人源化小鼠。該品系小鼠可以通過移植人臍帶血CD34+細(xì)胞，在免疫缺陷鼠NOG/NPG體內(nèi)重建免疫系統(tǒng)后獲得。特別適用于免疫腫瘤學(xué)、傳染病、宿主-抗體疾病的長期研究。

b. PBMC（外周血單核細(xì)胞）人源化小鼠。該品系小鼠則多通過靜脈注射或腹腔注射分離的人外周血單核細(xì)胞入免疫缺陷鼠并重建免疫系統(tǒng)后獲得。適合用于研究T細(xì)胞調(diào)節(jié)的藥物及感染和免疫排斥研究。

上述兩種人源化小鼠本質(zhì)上是通過將人的免疫細(xì)胞注射入免疫缺陷型小鼠中，在小鼠體內(nèi)重建并模擬人體免疫系統(tǒng)。每次實驗均需單獨構(gòu)建。

人源化（基因工程）小鼠

該品系小鼠并不直接引入大量的人免疫細(xì)胞，而是針對性地將小鼠特定的靶點蛋白或其胞外段（如CTLA4和PD-1等）人源化形成轉(zhuǎn)基因小鼠。這種形式的人源化小鼠在很多情況下是可遺傳的 

在了解了不同小鼠模型的區(qū)別之后，我們一起來看看各單抗抑制劑在動物實驗中的使用 

Avelumab (M3813)

Avelumab 是一種獨特的強(qiáng)ADCC活性的PD-L1全人源化抗體，能有效地阻止PD-L1與PD-1的結(jié)合。因為Avelumab與人和小鼠的PD-L1都有很高的親和力，所以構(gòu)建腫瘤模型時使用的是C57BL品系小鼠。首先將MB49親代細(xì)胞經(jīng)皮下注射至C57BL/6小鼠體內(nèi)，待腫瘤長至適當(dāng)體積。將Avelumab及同型對照都經(jīng)DPBS稀釋后用于注射。對荷瘤小鼠進(jìn)行腹腔注射3次，每次間隔3天。由于Avelumab是人IgG1，因此必須在7-9天的窗口內(nèi)集中注射3次，以避免中和小鼠抗人Ig的出現(xiàn)。

結(jié)果表明，Avelumab可明顯抑制MB49的腫瘤生長，并提高小鼠存活率。

參考文獻(xiàn)：Systemic Immunotherapy of Non–Muscle Invasive Mouse Bladder Cancer with Avelumab, an Anti–PD-L1 Immune Checkpoint InhibitorTrastuzumab (M6218)

Trastuzumab是人源化單抗抑制劑，與HER2的胞外區(qū)域相結(jié)合，適用于人源或免疫缺陷型小鼠。從EC病人處獲得的ESCC組織移植到SCID小鼠體內(nèi)。90天后再從這些小鼠體內(nèi)將ESCC外植體取出并進(jìn)一步移植到裸鼠體內(nèi)，以此進(jìn)行3代鼠傳鼠的移植后，基本穩(wěn)定建立具有HER2表達(dá)差異和PIK3CA基因突變的病人來源的食管鱗狀細(xì)胞癌外植體(PDECX)小鼠模型。將PDECX小鼠分為對照組和實驗組，實驗組的小鼠接受Trastuzumab的單藥治療（腹膜注射，每周4 mg / kg /兩次）或Trastuzumab與AKT抑制劑AZD5363的組合（口服給藥，每天120 mg / kg /兩次）治療。每周兩次檢測裸鼠的皮下腫瘤和小鼠體重。

結(jié)果表明，PIK3CA基因突變且HER2表達(dá)陽性的PDECX小鼠對Trastuzumab或AZD5363的單獨治療不敏感，但Trastuzumab與AZD5363的聯(lián)合治療能明顯地抑制該腫瘤的生長。

參考文獻(xiàn)：Trastuzumab anti-tumor efficacy in patient-derived esophageal squamous cell carcinoma xenograft (PDECX) mouse mode 

Nivolumab (M6100)

Nivolumab是一種通過基因工程改造的、人類免疫球蛋白(Ig)G4單克隆抗體，靶向具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能的人類細(xì)胞表面受體程序性死亡-1（PD-1, PCD-1），適用于人源小鼠。首先分離收集人的淋巴細(xì)胞，并通過尾靜脈注射將其注入NPG小鼠體內(nèi)以構(gòu)建PBMC人源化小鼠。待小鼠血液中人CD45陽性細(xì)胞超過25%后，為小鼠皮下接種KHOS細(xì)胞，并每隔5天以10mg/kg的劑量腹膜內(nèi)注射無菌鹽水或Nivolumab，總共注射五次。

結(jié)果表明，Nivolumab能夠抑制體內(nèi)骨肉瘤轉(zhuǎn)移。同時，Nivolumab治療組的肺轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)明顯少于對照組。

參考文獻(xiàn)：PD-1 axis expression in musculoskeletal tumors and antitumor effect of nivolumab in osteosarcoma model of humanized mouse

Adalimumab (M6222)

Adalimumab是靶向TNF-alpha的人源化單克隆抗體，抑制TNF-alpha，適用于人源及非人源化小鼠。首先將有BALB/c背景的SKG小鼠進(jìn)行分組，一部分腹腔內(nèi)注射經(jīng)PBS稀釋的Curdlan ，另一部分僅注射PBS。然后再將一半數(shù)量的注射了Curdlan的小鼠給與Adalimumab的治療。

結(jié)果顯示，Adalimumab能很明顯地改善由Curdlan誘導(dǎo)的SKG小鼠外周關(guān)節(jié)炎。

參考文獻(xiàn)：Effect of tumor necrosis factor inhibition on spinal inflammation and spinal ankylosis in SKG mi 

Atezolizumab (M6101)

Atezolizumab是人源、IgG1單克隆抗體，阻止PD-L1與PD-1和B7.1的相互作用，但不影響PD-L2與PD-1的相互作用，適用于人源及非人源化小鼠。首先將CT26細(xì)胞經(jīng)皮下注射入BALB/C小鼠體內(nèi)，待腫瘤長至適當(dāng)體積，再將Atezolizumab或?qū)φ誌gG經(jīng)腹膜注射入小鼠。之后收集腫瘤，并檢測其中活細(xì)胞上CD80或CD86的表面表達(dá)。

結(jié)果表明，Atezolizumab能夠很好地消耗腫瘤浸潤APC上的CD80。

參考文獻(xiàn)：PD-L1:CD80 Cis-Heterodimer Triggers the Co-stimulatory Receptor CD28 While Repressing the Inhibitory PD-1 and CTLA-4 Pathways 

Bevacizumab (M6166)

Bevacizumab是一種人源化血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）抗體，適用于人源及非人源化小鼠。將Nluc-H1915細(xì)胞皮下接種入SCID小鼠構(gòu)建腫瘤模型。當(dāng)腫瘤長至適當(dāng)體積時，隨機(jī)分為對照組和實驗組，分別以5 mg/kg的劑量每周一次注射HuIgG和Bevacizumab。在第22天檢測腫瘤體積以及Nluc活性。

結(jié)果表明，接受Bevacizumab治療的小鼠腫瘤平均體積以及平均Nluc活性均顯著低于對照組。

參考文獻(xiàn)：Bevacizumab suppresses the growth of established non-small-cell lung cancer brain metastases in a hematogenous brain metastasis model

 Ipilimumab (M6104)

Ipilimumab (MDX-010, BMS-734016) 是一種免疫調(diào)節(jié)單克隆抗體，靶向細(xì)胞表面抗原CTLA-4；也是一種免疫檢查點抑制劑。培養(yǎng)來自于正常健康白細(xì)胞供體的外周血單核細(xì)胞（PBMC），并用不同濃度的SEB刺激。然后將10μg/mL的Ipilimumab，Nivolumab或HuIgG4同種型對照加入其中。第3天通過ELISA測量IL-2分泌。

結(jié)果表明，在SEB刺激的PBMC培養(yǎng)物中，雖然單獨使用Nivolumab或Ipilimumab均增加IL-2的釋放，但兩種抗體的組合使用則能更高程度上刺激IL-2的釋放。

 

參考文獻(xiàn)：Preclinical Development of Ipilimumab and Nivolumab Combination Immunotherapy: Mouse Tumor Models, In Vitro Functional Studies, and Cynomolgus Macaque Toxicolog

       奧默生物技術(shù)（上海）有限公司持續(xù)焦距生物醫(yī)藥最新進(jìn)展，不斷推出各種“First-in-class”、“Best-in-class”的高品質(zhì)活性分子，產(chǎn)品涵蓋抑制劑/激動劑，人源化單抗，活性肽，天然產(chǎn)物，細(xì)胞因子等熱門類別，涉及信號通路、腫瘤、代謝、炎癥免疫、神經(jīng)科學(xué)、感染等研究領(lǐng)域和重要蛋白靶點。
       數(shù)萬個產(chǎn)品在上海有現(xiàn)貨儲備，發(fā)貨快捷。擁有專業(yè)的售后服務(wù)，隨后提供完備的產(chǎn)品質(zhì)檢報告。

       ChemBridge被譽(yù)為“化合物庫中的金標(biāo)準(zhǔn)”，于1993年成立于美國芝加哥。26年前，在世界范圍內(nèi)第一個推出基于3D藥效團(tuán)設(shè)計的多樣性化合物庫。早在1996年便可提供全產(chǎn)品的質(zhì)控圖譜并完成所有產(chǎn)品的二維碼編號。經(jīng)過近30年積累，目前已擁有超130萬個類藥性化合物，超13000個大環(huán)類化合物，超14000個化學(xué)砌塊，累計為全球客戶提供了超過3000萬個化合物。與Pfizer、Merck、AstraZeneca等國際知名制藥企業(yè)均有深度合作。
       ChemBridge官方指定的中國唯一合作伙伴—AbMole(奧默生物)。

中國官網(wǎng)：www.abmole.cn
美國官網(wǎng)：www.abmole.com
產(chǎn)品僅供實驗室人員研究使用，不對個人出售。