western blot 是半定量研究蛋白質表達的基礎實驗,常應用于對生物體內信號通路、代謝途徑的研究,對其中起到關鍵作用的蛋白進行研究,用于蛋白的定性和定量研究。
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western blot 是半定量研究蛋白質表達的基礎實驗,常應用于對生物體內信號通路、代謝途徑的研究,對其中起到關鍵作用的蛋白進行研究,用于蛋白的定性和定量研究。
western blot 操作關鍵步驟
1.組織采集或細胞培養
2.樣品制備
3.SDS-PAGE
4.轉膜
5.一抗的孵育
6.二抗的孵育
7.顯影
Western blot實驗樣品要求:
1.新鮮或正確保存的組織、細胞或蛋白樣品。
2.組織樣品:每份樣品約250~500mg;
3.細胞樣品:每份樣品約1×106~1×107 細胞數;
4.蛋白樣品:裂解樣品總蛋白量>500μg/樣品,濃度≥2μg/μl。
冷凍樣品應保存于-80℃,最好使用干冰運輸到達實驗室。
Western blot實驗報告呈現:
1.樣品處理流程;
2.實驗操作步驟;
3.原始WB圖片;
4.軟件Image J初步分析灰度值表;
5.如有需要提供柱狀圖