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細菌基因組測序分析
細菌基因組測序,可分為細菌基因組de novo測序和細菌基因組重測序兩類。
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最后更新:2018-1-30半年訪問:25
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細菌基因組測序分析

細菌基因組測序介紹

細菌基因組測序,可分為細菌基因組de novo測序和細菌基因組重測序兩類。細菌基因組de novo測序,即從頭測序是指不需要任何現(xiàn)有的序列信息就可以對某個細菌物種進行測序,利用生物信息學分析手段對序列進行拼裝,從而獲得該細菌物種的基因組序列。細菌基因組重測序是對已有參考序列(Reference Sequence)的物種的不同個體進行基因組測序,并以此為基礎進行個體或群體水平的差異性分析。可關注大量的單核苷酸多態(tài)性位點(SNP)、插入缺失(InDel, Insertion/Deletion)、結構變異(Structure Variation,SV)等變異信息。細菌基因組測序可以預測重要基因和蛋白以了解其功能和可能機制,已取代傳統(tǒng)方法成為研究細菌進化遺傳機制、關鍵功能基因的重要工具。

 

 

根據(jù)不同的研究目的和需求,細菌基因組測序可具體分為以下產品: 

細菌重測序

構建小片段文庫,深度測序,基于已知參考基因組關注基因組變異情況(包括SNP和InDel等),可進行群體研究。 

細菌denovo測序

細菌框架圖:構建小片段文庫,采用高深度測序(100X)和初級的基因組從頭組裝策略,可滿足細菌基因組研究的基礎需求。 
細菌精細:構建大片段和小片段文庫,采用高深度測序(150X)和針對性的基因組從頭組裝策略,是目前細菌基因組研究的主導產品。 
:根據(jù)待測菌株具體情況量身定制最優(yōu)策略,構建不同大小片段及類型文庫,綜合利用多種高通量測序技術及組裝技術,最終組裝得到一條完整的基因組序列(1 Contig,0 gap),是細菌基因組測序從頭組裝的最高標準。 

 

流程圖

 

結果示例


 
案例分析
案例:耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)全基因組測序揭示其傳播機制及系統(tǒng)發(fā)育 

Genome sequencing defines phylogeny and spread of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in a high transmission setting. Genome Res. 2015 January; 25(1): 111–118.

 


耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)是一種常見的引發(fā)醫(yī)院內感染的致病菌,本研究對泰國東北部一家醫(yī)院分離出的79株菌進行了全基因組測序,繪制了該菌的系統(tǒng)發(fā)育樹,并發(fā)現(xiàn)了多個不同進化支,據(jù)此推理出感染病人之間的MRAS傳播途徑。 
 

技術參數(shù)

    • 產品
    測序策略 交付指標 周期
    細菌重測序 HiSeq/MiSeq, 500bp文庫 ≥100X 40個工作日
    細菌框架圖 HiSeq/MiSeq, 500bp文庫 ≥100X 35個工作日
    細菌精細圖 HiSeq/MiSeq, 500bp+6K文庫 ≥150X 
    (小片段100X, 大片段50X) 
    1-7M: Scaffold<25個 
    7-10M: Scaffold<45個
    45個工作日
    細菌完成圖 多測序平臺及多類型文庫 1 Contig, 0gap 75個工作日

     

    樣品要求

    樣品類型 檢測方法 總量 濃度 其他要求
    DNA Qubit、AGE 小片段文庫:≥ 1.5μg 
    大片段文庫:≥20μg 
    PCR-free :≥10μg
    小片段文庫: > 50ng/μL 
    大片段文庫: > 133 ng/μL 
    PCR-free : ≥30 ng/μL
    OD260/280= 1.8~2.0
     

 

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