產品定義

熒光差異雙向凝膠電泳（DIGE）是一種在2D電泳之前標記蛋白質樣品的方法，可以對樣品間蛋白質豐度進行精確分析。

技術原理

Ettan DIGE熒光差異蛋白質表達分析系統在傳統雙向凝膠電泳技術的基礎上，結合多重熒光分析的方法，在同一塊膠上共同分離多個分別由不同熒光標記（Cy2，Cy3，Cy5）的樣品，并且第一次引入內標的概念，極大地提高結果的準確性、可靠性和重復性。在DIGE實驗中，每個蛋白質點都有它自己的內標，并且軟件全自動根據每個蛋白質點的內標對其表達量進行校準，保證所檢測到的蛋白質豐度變化是真實的。

Ⅰ 熒光染料采用分子量和等電點相互匹配的三種熒光標記分子Cy2、Cy3、Cy5，其特殊設計的NHS脂活性基團通過氨基酸橋連接作用于蛋白質的賴氨酸上，使檢測靈敏度達到125pg。

Ⅱ Cy2標記所有樣品的等量混合樣作為內標，理論上包含了需要分析樣品的所有蛋白質點，存在于每一塊需要被分析的膠中。采用專業軟件對蛋白質點作出更加可觀的定量變化分析。

實驗流程

                                                                                              注釋：“樣品及實驗預判”包括蛋白質定量、至少一次

                                                                                              雙向凝膠電泳實驗，對樣品質量判斷及實驗條件優化。

技術優勢

相對應傳統的雙向電泳技術，檢測靈敏度更高，大大節約樣品；

采用內標對數據進行歸一化處理，消除膠與膠之間差異造成的誤差，準確度高。

應用領域

疾病標志物篩選                    作用機制研究

植物抗逆研究                       藥物作用靶點研究

特殊功能蛋白質篩選

樣品需求

技術參考案例

[1]    Samuel MA, Tang W, et al. Proteomic analysis of Brassica stigmatic proteins following the self-incompatibility reaction reveals a role for microtubule dynamics during pollen responses. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(12).

[2]    De la Cuesta F, Alvarez-Llamas, et al. A proteomic focus on the alterations occurring at the human atherosclerotic coronary intima. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(4).

[3]    Hong Y, Peng J, et al. Proteomic analysis of Schistosoma japonicum Schistosomulum proteins that are differentially expressed among hosts differing in their susceptibility to the infection. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(8).