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磷酸化抗體制備服務(wù)--周期短，服務(wù)周到，歡迎咨詢！
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磷酸化兔多克隆抗體制備服務(wù)（￥12000/項目）
合成1條磷酸化多肽和1條完全一樣的非磷酸化多肽
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磷酸化多肽偶聯(lián)KLH
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空白血抗原ELISA檢測挑選低背景大白兔
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KLH+磷酸化多肽免疫新西蘭大白兔2只
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100μg/只白兔免疫三次以上，采集血清
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Protein G純化收集血清中總IgG
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磷酸化多肽偶聯(lián)純化填料親和總IgG，洗脫得到目的IgG
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目的IgG穿非磷酸化多肽偶聯(lián)的填料
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收集洗脫液（含有最終的抗磷酸化多肽IgG），進行濃縮，透析|
磷酸化小鼠單克隆抗體制備（￥36000/項目）
合成1條磷酸化多肽和1條完全一樣的非磷酸化多肽
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磷酸化多肽偶聯(lián)KLH
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免疫5只Bablc小鼠，免疫量50ug/只,最終達(dá)到融合效價>1:10000
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融合前3-5天，無佐劑50ug/只，加強免疫效價最高的小鼠
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取脾臟分離成單細(xì)胞與對數(shù)期的SP2/0按5：1混合，進行細(xì)胞融合，20%胎牛血清，HAT選擇培養(yǎng)基，鋪10塊96孔板
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偶聯(lián)BSA+磷酸化多肽、BSA+非磷酸化多肽
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融合后7天，ELISA檢測96孔板上清。包被ELISA板(BSA+磷酸化多肽作為陽性，BSA+非磷酸多肽作為陰性)。
↓
陰性（正常培養(yǎng)基）OD<0.1，陽性O(shè)D>0.5視為磷酸化多肽陽性孔
↓
挑選OD值高的陽性細(xì)胞孔，進行后續(xù)亞克隆，直到含有細(xì)胞的所有孔均為陽性
↓
亞克隆后的陽性孔進行擴大培養(yǎng)
↓
擴大培養(yǎng)上清，按客戶要求進行功能檢測（WB/ELISA/IHC），滿足客戶要求后，將應(yīng)客戶要求交付細(xì)胞（每株細(xì)胞2管）
↓
客戶指定細(xì)胞株生產(chǎn)10mL腹水
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磷酸化多肽偶聯(lián)KLH
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免疫5只Bablc小鼠，免疫量50ug/只,最終達(dá)到融合效價>1:10000
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融合前3-5天，無佐劑50ug/只，加強免疫效價最高的小鼠
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取脾臟分離成單細(xì)胞與對數(shù)期的SP2/0按5：1混合，進行細(xì)胞融合，20%胎牛血清，HAT選擇培養(yǎng)基，鋪10塊96孔板
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偶聯(lián)BSA+磷酸化多肽、BSA+非磷酸化多肽
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融合后7天，ELISA檢測96孔板上清。包被ELISA板(BSA+磷酸化多肽作為陽性，BSA+非磷酸多肽作為陰性)。
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陰性（正常培養(yǎng)基）OD<0.1，陽性O(shè)D>0.5視為磷酸化多肽陽性孔
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挑選OD值高的陽性細(xì)胞孔，進行后續(xù)亞克隆，直到含有細(xì)胞的所有孔均為陽性
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亞克隆后的陽性孔進行擴大培養(yǎng)
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擴大培養(yǎng)上清，按客戶要求進行功能檢測（WB/ELISA/IHC），滿足客戶要求后，將應(yīng)客戶要求交付細(xì)胞（每株細(xì)胞2管）
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客戶指定細(xì)胞株生產(chǎn)10mL腹水
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