![]() |
microRNA質粒/載體構建(過表達載體構建,靶基因報告載體/ 熒光素酶報告載體構建 )
|
|||||||||||||||||
[發表評論] [本類其他服務] [本類其他服務商] |
服務商: 百奧邁科生物技術有限公司 | 查看該公司所有服務 >> |
microRNA 過表達載體構建
真核生物MicroRNA的產生有三種形式。1)miRNA以長的pri-miRNA形式從基因組中轉錄出來;2)pri-miRNA被RNAaseIII內切酶或剪接體組分切割,形成大約60~70nt的pre-miRNA;3)pre-miRNA被運出細胞核,進而在Dicer樣內切酶切割下,形成miRNA。
本公司提供miRNA質粒的構建服務,采用U6、CMV啟動子構建的miRNA表達載體,可以在細胞內直接轉錄出miRNA,行使其功能。同時還可以提供pre-miRNA表達載體及腺病毒載體 (Adenoviral),慢病毒載體(Lentiviral),逆轉錄病毒載體 (Retroviral) 病毒型載體構建服務。基于載體的miRNA構建流程:
1、客戶可選:
提供不同長度、不同形式,由客戶自行設計的miRNA,由本公司將其克隆到miRNA表達載體上。
也可據需要,提供來自Sanger miRNA數據庫的miRNA序列,由本公司將其克隆到miRNA表達載體上。
提供商業化的miRNA表達載體。
2、合成設計好的DNA序列,將其克隆到客戶要求的載體上,并通過測序進行驗證。
3、構建好的miRNA質粒連同測序文件、產品說明書一起寄送到客戶手中。
載體名稱 | 啟動子 | 篩選基因 | 標記基因 |
pRNAi-U6.1/Neo | U6 | Neomycin | GFP |
pRNAi-CMV3.2/Neo | CMV | Neomycin | GFP |
pRNAi-CMV4.1/Neo (pSilencer4.1) |
CMV | Neomycin |
A. 優點:
MiRNA 熒光素酶報告載體具有以下優點:
· 功能性檢測:是一種功能性的分析方法,用于監測細胞內miRNA介導的靶基因的調控
· 可定量分析: miRNAs介導的調控可以通過熒光素酶基因的表達進行定量監測
· 可構建穩定細胞系–載體可用于構建表達報告基因的穩定細胞系.
B. 原理:
pLuc-3UTR報告載體是一系列基于熒光素酶報告的構建體,用于監測miRNA介導的細胞內靶基因調控。每個載體含有CMV啟動子、熒光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40終止子序列。MiRNA的表達并與3 ' UTR結合,導致熒光素酶基因表達的抑制。因此miRNA介導的特異靶的調控可通過熒光素酶活*進行監測。比較二個樣本熒光素酶活性可解析調控,明確差異。
本公司的可免費提供的microRNA靶基因報告載體 有:
載體名稱 | 啟動子 | 標記基因 |
pGL4.17 | CMV | 熒光素酶基因 |
pGL-Basic | CMV | 熒光素酶基因 |
pGL3-Control | CMV | 熒光素酶基因 |
pRL-TK | CMV | 熒光素酶基因 |