細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

phospho-CREM (Ser271 +Ser 274)  磷酸化環磷酸腺苷反應元件調節蛋白抗體 0.1ml
Rabbit Anti-human IgG/Gold  膠體金標記的兔抗人IgG 0.5ml
Cyclophilin D  親環蛋白（親環素）40抗體 0.2ml
TRIM36/RNF98  環指蛋白98抗體 0.2ml
phospho-P53(Ser6)  磷酸化腫瘤抑制基因P53抗體 0.1ml
PDI/P4HB/ERBA2L/PDIA3  蛋白質二硫鍵異構酶抗體 0.1ml
PCMT1  天門冬氨酸甲基轉移酶PCMT抗體 0.2ml
HLA G(C-terminal)  人類白細胞抗原G抗體（C端） 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgG/RBITC  羅丹明標記的兔抗猴IgG 0.3ml
Bad  相關死亡促進因子Bad抗體 0.1ml
ECRG4/C2orf40  食道癌相關基因4蛋白抗體 0.2ml
羽扇烯;Lupene CAS 1617-70-5 規格： 20mg 訂購|咨詢
丙克威;純品型;標準品;有證書 CAS 82560-54-1 規格： 0.1g 訂購|咨詢
2-(3,4-二羥基苯基)-3-(β-D CAS 7084-24-4 規格： HPLC≥98%，5mg/vial 訂購|咨詢
百秋李醇 CAS 5986-55-0 規格： HPLC≥98%；20mg/vial 訂購|咨詢
金剛烷胺 CAS 665-66-7 規格： 50mg 訂購|咨詢
穿琥寧 CAS  規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
人腎透明細胞腺癌細胞；769-P培養千金子素L3 CAS  規格： 20mg 訂購|咨詢
王不留行黃苷 CAS  規格： HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢
苦杏仁苷 CAS 29883-15-6 規格： 20mg 訂購|咨詢
莨菪堿 CAS 101-31-5 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
奧美拉唑鈉磺酰化物 CAS 73590-58-6 規格： 5mg 訂購|咨詢
3,5,6,7,8,3,,4’-七甲氧基 CAS  規格： 10mg 訂購|咨詢

第一種：

是凍存產品，由液氮直接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態影響較大，一旦細胞狀態不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。

第二種：

是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。

質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的細胞名稱、種屬、貨號、數量、協商細胞價格并預約發貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。