細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Rabbit anti-mouse IgG-Fc fragment whole serum  兔抗小鼠IgG-Fc段抗血清 1ml
CDK1/Cdc2  周期素依賴(lài)性激酶1抗體 0.1ml
phospho-ATM(Ser1981)  磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體 0.1ml
JNK1/3  氨基末端激酶1/3抗體 0.1ml
KCNAB1/Kv beta 1  電壓門(mén)控鉀通道蛋白1抗體 0.2ml
phospho-CK II beta(Ser209)  磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶II β(casein kinase IIβ)抗體 0.1ml
TRAF6  腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6抗體 0.1ml
HDAC3/HD3  組蛋白去乙�；�酶3抗體 0.1ml
ER-α  雌激素受體α抗體 0.1ml
ELMO1  吞噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)蛋白1抗體 0.2ml
phospho-IRS1(Ser789)  磷酸化胰島素受體底物-1抗體 0.1ml
脒;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書(shū) CAS 6 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
藤黃微球菌 CAS  規(guī)格： 凍干粉 訂購(gòu)|咨詢(xún)
節(jié)裂角茴香 CAS  規(guī)格： 1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)
阿洛林 CAS 37091-66-0 規(guī)格： 100mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
絡(luò)緦 CAS 85026-55-7 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支 訂購(gòu)|咨詢(xún)
制霉菌素 CAS  規(guī)格： 100mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞；HCCLM3-GFP-LC3培養(yǎng)人參皂苷 Rg2 CAS 52286-74-5 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購(gòu)|咨詢(xún)
七葉皂苷鈉 CAS 20977-05-3 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
丹皮酚磺酸鈉 CAS 64-65-3 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
金 CAS  規(guī)格： 200mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
白花前胡醇;Ulopterol CAS 28095-18-3 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
牛膝對(duì)照藥材 CAS  規(guī)格： 1g 訂購(gòu)|咨詢(xún)

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。

第二種：

是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。

質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。

購(gòu)買(mǎi)客戶請(qǐng)先與我司細(xì)胞銷(xiāo)售人員核實(shí)訂購(gòu)的細(xì)胞名稱(chēng)、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷(xiāo)售人員索取細(xì)胞說(shuō)明書(shū)并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。