細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

DBX1  腦發(fā)育同源蛋白1抗體 0.2ml
NRAS  原癌基因N-Ras抗體 0.1ml
Thioredoxin  硫氧還蛋白抗體 0.1ml
NUBP1  核苷酸結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
TNIP2/ABIN2/TNFAIP3 interacting protein 2  腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3相互作用蛋白2抗體 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 0.1ml
ADAM19  去整合素樣金屬蛋白酶19抗體 0.2ml
CD72/Ly-32  CD72蛋白抗體 0.2ml
Mouse Anti-Goat IgG  小鼠抗羊IgG 1mg
PAP-α/β/γ  多聚合酶α/β/γ抗體 0.2ml
Lin28  RNA結(jié)合蛋白LIN28抗體 0.2ml
石榴子 CAS  規(guī)格： 1g 訂購|咨詢
甜菜堿;Betaine CAS 107-43-7 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
4-去甲氧基表鬼臼素 CAS 6559-91-7 規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢
福辛普利鈉雜質(zhì)A（福辛普利拉） CAS  規(guī)格： 50mg 訂購|咨詢
日蟾它靈;Gamabufalin CAS  規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞；A3培養(yǎng)磺隆;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 79277-27-3 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢
13-去羥基印烏堿 CAS  規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
南 標(biāo)準(zhǔn)品 CAS  規(guī)格： 200mg 訂購|咨詢
維生素B6(鹽吡哆醇);純品型;標(biāo)準(zhǔn) CAS 58-56-0 規(guī)格： 0.25g 訂購|咨詢
甜菜寧;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 13684-63-4 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢
異補(bǔ)骨脂素;Isopsoralen CAS 523-50-2 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
莎稗磷;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品-莎薭磷;有證書 CAS 64249-01-0 規(guī)格： 0.1g 訂購|咨詢

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。

第二種：

是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。

質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的細(xì)胞名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。