細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Mouse Anti-human IgG/Bio  生物素標(biāo)記的小鼠抗人IgG 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/PE  PE標(biāo)記的兔抗雞IgG 0.1ml
phospho-GNA12(Ser68)  磷酸化鳥苷酸調(diào)節(jié)蛋白12抗體 0.1ml
TEF3/TEAD4  轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體 0.2ml
NDUFAF4  激素調(diào)節(jié)增值細(xì)胞相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
FMN2  形成素2抗體（成蛋白） 0.2ml
R-cadherin/Cadherin 4  R-鈣粘附分子抗體 0.1ml
Goat Anti-human IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgG 0.1ml
CTHRC1  膠原三股螺旋重復(fù)蛋白1抗體 0.2ml
Phospho-cdc25A (Ser76)  磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體 0.1ml
Phospho-Torc2/Crtc2(Ser171)  磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體 0.1ml
升麻素苷 英文名稱 Prim-o-glucosylcimifugin  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
升麻素 英文名稱 cimifugin  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
類葉升麻苷(麥角甾苷) 英文名稱 acteoside  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
異類葉升麻苷(異麥角甾苷) 英文名稱 Isoacteoside  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
 英文名稱 methylvisamminol  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量：
松果菊苷 英文名稱 Echinacoside  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
5-O-甲基維斯阿米醇苷 英文名稱 4’-O-glucopyranosyl-5-O-  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
人卵巢畸胎瘤細(xì)胞；PA-1說明書鹽酸藥根堿 英文名稱 Jatrorrhizine Hydrochloride  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
鹽酸吐根酚堿 英文名稱 Cephaeline hydrochloride  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
白屈菜紅堿 英文名稱 Chelerythrine  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。

第二種：

是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。

質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的細(xì)胞名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。