
細胞名稱
人皮膚黑色素瘤細胞;SK-MEL-1培養(yǎng)
形態(tài)特性 球形
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞由Oettgen F及其同事從一名29歲的患有廣泛、快速進展性惡性黑色素瘤的白人男性患者的胸導管中分離建立的。該細胞可產(chǎn)生黑色素,電鏡檢測發(fā)現(xiàn)細胞中色素顆粒與自身合成和吞噬作用相關。在63%的惡性黑色素瘤患者和10%其他疾病患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了針對該細胞系的抗體。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 維持細胞濃度在1×105~2×105,每周補液2~3次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:12,13;D13S317:11;D16S539:11,12;D18S51:13,16;D19S433:15,16.2;D21S11:29,32.2;D2S1338:19,23;D3S1358:14,16;D5S818:12,13;D7S820:12;D8S1179:16;FGA:18,20;TH01:6;TPOX:11;vWA:16,17;
同工酶
染色體 53~73,XY
運輸和保存:
人皮膚黑色素瘤細胞;SK-MEL-1培養(yǎng)視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
可以重發(fā)的情況有哪些?
(1)人皮膚黑色素瘤細胞;SK-MEL-1培養(yǎng)細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);
(2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);
(3)存活的細胞靜置24小時后,絕大多數(shù)細胞未存活,重發(fā);
(4)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
(5)視具體情況而定。
出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)人皮膚黑色素瘤細胞;SK-MEL-1培養(yǎng)客戶造成細胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)細胞狀態(tài)不好,未細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(4)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(5)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
細胞特性:
5)細胞生長方式:上皮樣,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態(tài),細胞最好在對數(shù)生長期,細胞密度適合,剛剛發(fā)生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態(tài)不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養(yǎng)皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培養(yǎng)基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節(jié)約處就節(jié)約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍”,傳統(tǒng)的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內(nèi)裝異丙醇,在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。

LCEAH/ECHS1 長鏈烯脂酰輔酶A水化酶抗體 0.1ml
NEK7 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Nek7抗體 0.2ml
MAOA 單氨氧化酶A抗體 0.1ml
STAT2 信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體 0.1ml
Mouse anti-human IgM ascites 小鼠抗人IgM腹水 1ml
CD38 CD38抗體 0.1ml
procollagen type IIA Ⅱ型膠原α1抗體 0.2ml
ICOS/CD278 誘導協(xié)同刺激分子CD278抗體 0.2ml
GIMAP6 GTP酶IMAP家族成員6抗體 0.2ml
Renalase 腎胺酶抗體 0.2ml
phospho-Tau protein(Ser404) 磷酸化微管相關蛋白抗體 0.1ml
山茱萸苷 英文名稱 cornin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
莫諾苷 英文名稱 morroniside 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
(R型)人參皂苷Rg2 英文名稱 Ginsenoside Rg2 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
商陸皂苷甲 英文名稱 esculentosideA 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
商陸皂苷丁 英文名稱 esculentosideD 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
商陸皂苷乙 英文名稱 esculentosideB 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
人皮膚黑色素瘤細胞;SK-MEL-1培養(yǎng)商陸皂苷丙 英文名稱 esculentosideC 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
牡荊素異鼠李糖苷 英文名稱 Rhamnosylvitexin 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
商陸皂苷戊 英文名稱 esculentosideE 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
牡荊素鼠李糖苷 英文名稱 vitexin-2″-o-rhamnoside 規(guī)格: 20mg/支進口/國產(chǎn) 含量: HPLC≥98%