細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

Phospho-MARCKS(Ser170)  磷酸化丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗體 0.1ml
Hairless  無毛發蛋白抗體 0.2ml
AKAP6  蛋白激酶A錨定蛋白6抗體 0.2ml
ZNF431  鋅指蛋白431抗體 0.2ml
Histone H3-like protein  組蛋白H3樣抗體 0.2ml
phospho-ERK5( Ser731+Thr733)  磷酸化細胞外信號調節激酶5抗體 0.1ml
KLK3/Prostate Specific Antigen  激肽釋放酶3/舒血管素3抗體 0.2ml
LTB4-R1/BLTR  白三烯B4受體1抗體 0.1ml
phospho-PTPN7(Ser93)  磷酸化非受體型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗體 0.1ml
phospho-Androgen Receptor(Ser580)  磷酸化雄激素受體抗體 0.1ml
Goat Anti-rat IgG  羊抗大鼠IgG 1mg
沙門、志賀菌屬瓊脂對照培養基 英文名稱 培養基適應性  規格:  20mg/支進口/國產 含量
酪蛋白 英文名稱 效價測定  規格:  20mg/支進口/國產 含量：
可溶性淀粉 英文名稱 效價測定  規格:  20mg/支進口/國產 含量： 
玻璃酸酶 英文名稱 效價測定  規格:  20mg/支進口/國產 含量：
纖維蛋白溶酶原（牛血） 英文名稱 供尿激酶效價測定用試劑  規格:  20mg/支進口/國產 含量：
尿激酶（UK） 英文名稱 供尿激酶效價測定用試劑  規格:  20mg/支進口/國產 含量： 
凝血酶（牛血） 英文名稱 供尿激酶效價測定用  規格:  20mg/支進口/國產 含量： 
人纖維肉瘤細胞；HT-1080說明書牛血紅蛋白 英文名稱 供尿激酶效價測定用試劑  規格:  20mg/支進口/國產 含量： 
纖維蛋白原（牛血） 英文名稱 供尿激酶效價測定用  規格:  20mg/支進口/國產 含量： 
L-酪氨酸 英文名稱 效價測定  規格:  20mg/支進口/國產 含量：

第一種：

是凍存產品，由液氮直接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態影響較大，一旦細胞狀態不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。

第二種：

是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。

質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的細胞名稱、種屬、貨號、數量、協商細胞價格并預約發貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。