
細胞名稱
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0927培養
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞系來源于一成年男性的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
運輸和保存:
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0927培養視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養,如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿完全培養基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
可以重發的情況有哪些?
(1)EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0927培養細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發;
(2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數細胞未存活,重發;
(3)存活的細胞靜置24小時后,絕大多數細胞未存活,重發;
(4)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,出現污染,重發;
(5)視具體情況而定。
出現問題,不予以重發的情況有哪些?
(1)EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0927培養客戶造成細胞污染,不重發;
(2)客戶不正確操作致細胞狀態不好,不重發;
(3)細胞狀態不好,未細胞培養前3天照片的,不重發;
(4)細胞培養時經其它處理的,不重發;
(5)細胞收到2天內,未告知,不重發;
細胞特性:
1)】EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0927培養組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細胞鑒定:細胞角蛋白-18(CK-18)免疫熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,不規則細胞,貼壁培養。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態,細胞最好在對數生長期,細胞密度適合,剛剛發生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培養基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節約處就節約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍”,傳統的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。

GPR171/Platelet Activating Receptor H963 G蛋白偶聯受體171抗體 0.2ml
Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的羊抗人IgM 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體 0.1ml
CCR5/CD195 細胞表面趨化因子受體5抗體 0.1ml
SPRR3/Cornifin B 角質蛋白β抗體 0.2ml
Phospho-NEDD4L (Ser342) 磷酸化泛素連接酶NEDD4-2抗體 0.1ml
GTF2B 通用轉錄因子GTF2B抗體 0.2ml
BTF/BCLAF1 Bcl2相關轉錄因子抗體 0.2ml
Mouse Anti-rabbit IgG/APC APC標記的小鼠抗兔IgG 0.1ml
phospho-c-Abl(Tyr89) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 0.1ml
CYP2D6 細胞色素P450 2D6抗體 0.1ml
人參皂苷Rh1 英文名稱 Ginsenoside Rh1 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥98%
人參皂苷Rh3 英文名稱 Ginsenoside Rh3 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥98%
人參皂苷Ro 英文名稱 Ginsenoside-Ro 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥97%
鞣花酸 英文名稱 Ellagic acid 規格: 20mg/支進口/國產 含量: 95% 98%
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0927培養傘形花內酯 英文名稱 Umbelliferone 規格: 20mg/支進口/國產 含量: 98%
瑞香素 英文名稱 Daphnetin 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥95%
三尖杉寧堿 英文名稱 Cephalomannine 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥95%
奈酚 英文名稱 Kaempferol 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥98%
桑色素 英文名稱 Morin 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥90%
奈酚葡萄糖醛酸苷 英文名稱 Kaempferol-3-beta-O-glucuronide 規格: 20mg/支進口/國產 含量: ≥98%