細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

CHKL/Ethanolamine kinase beta  激酶β抗體 0.2ml
phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser178)  磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體 0.1ml
CX3CL1  CX3CL1抗體 0.2ml
CACNA1A/Cav2.1  電壓依賴性鈣通道Cav2.1抗體 0.2ml
Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgG  0.1ml
Hamartin/TSC1  結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體 0.1ml
NPFF/FMRFamide  痛覺調(diào)節(jié)肽NPFF抗體 0.2ml
ART5  二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶5抗體 0.2ml
Sigma1R  衰老相關(guān)基因8蛋白抗體 0.2ml
FGF6  纖維母細(xì)胞生長因子6抗體 0.1ml
phospho-Crkl (Tyr207)  磷酸化接頭蛋白CrkL抗體 0.1ml
漆黃素(非瑟酮/紫鉚素) 英文名稱 Fisetin  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
苦玄參苷ⅠA 英文名稱 Piefeltarraenin ⅠA  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
苦玄參苷ⅠB 英文名稱 Piefeltarraenin ⅠB  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
蘆薈苷 英文名稱 barbaloin  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 英文名稱 Atractylenolide Ⅲ  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
人胚腎細(xì)胞；293 Cells, low passage說明書白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ 英文名稱 Atractylenolide I  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ 英文名稱 Atractylenolide II  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
膽酸（錯(cuò)誤） 英文名稱 Cholic Acid  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
毒靈 英文名稱 Bufalin  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%
膽紅素 英文名稱 Bilirubin  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。

第二種：

是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。

質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的細(xì)胞名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。