細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

MAP1B  微管相關蛋白1B抗體 0.2ml
MESP1  心血管發(fā)育中胚層相關蛋白1抗體 0.2ml
SSX8  滑膜肉瘤X斷點蛋白8抗體 0.1ml
CIDE B  DNA斷裂因子相似蛋白B抗體 0.2ml
KCND1/Kv4.1  電壓門控鉀通道Kv4.1抗體 0.2ml
AKT/PKB  蛋白激酶B 0.1ml
HPV16 E7 protein  人乳頭瘤病毒16型E7抗體 0.1ml
CD33/Siglec-3  CD33抗體 0.2ml
TH/T-H glycoprotein  TH糖蛋白抗體 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Gold  膠體金標記的驢抗豚鼠IgG 0.5ml
l-Myc  Myc基因肺癌相關蛋白抗體 0.1ml
葡萄糖酸鈣 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 檢查
莫林 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 檢查
酒石酸美托洛爾 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 含量測定
氟利多 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 含量測定
雙羥萘酸噻嘧啶 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 含量測定
人膀胱上皮永生化細胞；SV-HUC-1說明書硝基喃酸 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 檢查
豬去氧膽酸 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 含量測定
酚酞 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 含量測定
雙羥萘酸 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 含量測定
水楊酸片 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 溶出度校正片

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。

第二種：

是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。

質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。

購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的細胞名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細胞價格并預約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。