細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

C-SKI/v-SKI  C-SKI抗體 0.1ml
BDH1  3-羥脫氫酶抗體 0.2ml
BARD1  乳腺癌易感基因環(huán)狀結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 0.1ml
Phospho-NFKB1(Ser893)  磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 0.1ml
KBTBD4  BTB-kelch蛋白家族4抗體 0.2ml
MRP8+MRP14  多藥耐藥相關(guān)蛋白8/9/14抗體 0.2ml
Socs 2  細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白2抗體 0.1ml
OXSR1  氧化應(yīng)激反應(yīng)蛋白1抗體 0.2ml
Factor VII  凝血因子7抗體 0.1ml
GRM3  促代謝型谷氨酸受體M3抗體 0.2ml
APNG/MPG  N-甲基嘌呤DNA糖基化酶 0.2ml
尼索地平雜質(zhì)Ⅱ 英文名稱 供檢查用  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101158-201001
對(duì)氨基水楊酸鈉 英文名稱 供HPLC法  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101159-201001
間氨基酚 英文名稱 供檢查用  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101160-201001
華法林鈉 英文名稱 供HPLC法  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101163-201001
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；Mao說明書秋水仙堿 英文名稱 HPLC含量  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101176-201001
N-（4-氟苯甲酰基）酪胺 英文名稱 供HPLC法系統(tǒng)適用性  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101169-201001
磺胺 英文名稱 供檢查用  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101175-201001
對(duì)磺酸 英文名稱 供檢查用  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101180-201001
乳酸鈣 英文名稱 供TCL鑒別  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101179-201001
對(duì)丁甲（鹽酸丁卡因） 英文名稱 供TCL檢查用  規(guī)格:  20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量： 101183-201001

第一種：

是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。

第二種：

是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。

質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。

購(gòu)買客戶請(qǐng)先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購(gòu)的細(xì)胞名稱、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。