5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸產(chǎn)品及特點

BCIP，即5-Bromo-4-Chloro-3-IndolylPhosphate(5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸)，分子式為C8H4BrClNO4P·C7H9N，分子量為433.64，CAS號為6578-06-9。本產(chǎn)品為白色結(jié)晶，溶解度為20 mg/mL。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP會被水解產(chǎn)生強反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物會和NBT發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍色至藍紫色的NBTformazan。NBT/BCIP用于蛋白印跡和免疫組化染色等實驗。
低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸細菌的培養(yǎng)和收集：

將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時至對數(shù)生長后期。

5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸質(zhì)粒DNA少量快速提取：

質(zhì)粒DNA小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。

　　8、取20ml進行電泳檢查。

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