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蛋白膠中量回收試劑盒產品及特點
隨著蛋白質技術的發展,有必要從凝膠中回收蛋白質以用于制備抗體、免疫印跡、氨基酸組分分析或末端序列測定等。本產品就是專門為此用途開發的中量蛋白膠回收法,流程如下:
它具有下列特點:
1. 簡單,不需要復雜而昂貴的儀器(如電洗脫儀)。
2. 適用于水溶性蛋白和膜蛋白。
3. 處理量大,一次可處理1 g樣品。
4. 回收率一般在50-90%之間(跟蛋白質大小,洗脫時間相關)。
5. 跟后續的實驗兼容,包括2-D電泳、質譜測序等。
使用及效果
將膠塊轉移到塑料注射器中,注射到另一個塑料注射器中,反復重復5次,然后加入1 mL的溶液A,室溫放置5分鐘,離心后上清即為得到回收的蛋白質。
蛋白膠中量回收試劑盒細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
蛋白膠中量回收試劑盒質粒DNA少量快速提。
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
蛋白膠中量回收試劑盒(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY90407Lambda DNA5μg(A)|250μg(B)|250μg(C)XY130860φX174 RFⅠDNA30μgXY130861φX174RF Ⅱ DNA30μgXY130987接頭DNA5nmol(A)|5nmol(B)|5nmol(C)|5nmol(D)|5nmol(E)XY130988EcoR I-Not I-BamH I接頭1nmolXY130204Oligo快速復性液,10×1mLXY100103裂殖酵母化學感受態細胞制備試劑盒20次(A)|20次(B)XY81109酵母化學感受態細胞制備試劑盒20次(A)|20次(B)XY81201酵母電轉感受態細胞制備試劑盒20次XY100502高效E.coli感受態細胞制備試劑盒20次XY81024DH5α感受態細胞0.1mL×10XY81221HB101感受態細胞0.1mL×10XY90207JM109感受態細胞0.1mL×10XY90208SURE感受態細胞0.1mL×10XY80701TG1感受態細胞0.1mL×10XY80806Top10感受態細胞0.1mL×10XY90504XL1-Blue感受態細胞0.1mL×10