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非變性法蛋白沉淀試劑盒產品及特點
本產品是基于蛋白質鹽析和透析原理開發的蛋白質濃縮產品。其原理是將大量具有很強水化能力的硫酸銨加到蛋白質溶液中,奪取蛋白質分子的水化層(尤其是蛋白質表面非極性區的水化層),使之“失水”,于是蛋白質分子間的非極性基團將互相結合,使蛋白質形成沉淀,離心分離沉淀后,再用透析方法將蛋白質中的鹽除去,即得濃縮的蛋白質。其示意圖如下:
本產品以鹽析能力最強的硫酸銨作為蛋白質的沉淀劑,其特點是:
第一步:鹽析第二步:透析
1. 適合于濃縮各種蛋白質粗提液。
2. 非變性法,不會破壞蛋白質的天然結構和活性,尤其是適用于對變性敏感的酶溶液。
3. 得到的蛋白質結構穩定,適合于長期保存。
4. 可以在透析是進行緩沖液的調換。
5. 一站式,帶有鹽析和透析所需的物品。
使用及效果
按每mL蛋白質溶液加入1克硫酸銨的比例將兩者分多次混合,放置10分鐘后離心,棄上清后加適量緩沖液中,轉移到100倍體積的透析液中透析兩次。每次3-4小時即得濃縮的蛋白質溶液。
非變性法蛋白沉淀試劑盒細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
非變性法蛋白沉淀試劑盒質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
非變性法蛋白沉淀試劑盒(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
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