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遺傳霉素(G418)干粉產品及特點
G418又叫Geneticin(遺傳霉素),分子式為C20H40N4O10·2H2SO4,分子量為692.71,CAS號為108321-42-2,白色結晶,溶于水。在分子遺傳試驗中,是穩定轉染最常用的抗性篩選試劑。
它通過干擾核糖體功能而阻斷蛋白質合成,對原核和真核細胞都有毒性。真核細胞中表達細菌APH(氨基糖苷磷酸轉移酶)的基因(源自Tn5),可使G418失去作用。
常溫運輸,4℃避光保存、有效期一年。
遺傳霉素(G418)干粉細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
遺傳霉素(G418)干粉質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
遺傳霉素(G418)干粉(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY130413肝素瓊脂糖5mL|50mLXY130417藍膠瓊脂糖5mL|50mLXY130421DEAE交換介質50mLXY130423Q交換介質50mLXY130422CM交換介質50mLXY130424SP交換介質50mLXY131020Sephacryl S-400基質10mLXY130425苯基介質50mLXY130426丁基介質50mLXY130427丁基硫介質50mLXY130418Protein A瓊脂糖1mLXY130420Protein G瓊脂糖1mLXY131201Protein A+G瓊脂糖2mLXY100939福林酚試劑100mLXY90610卵白蛋白標準品1mLXY131070牛血清白蛋白標準品1mLXY131071牛血清γ 球蛋白標準品1mLXY131072預稀釋BSA 蛋白標準品1mLXY131220預稀釋BGG 蛋白標準品1mLXY131074SDS-PAGE 樣品預處理試劑盒50次XY131122考馬斯亮藍R-25010gXY131123考馬斯亮藍G-25010gXY131078天然蛋白A1mgXY131079重組蛋白A1mg
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