干粉型LB培養基產品及特點
LB培養基全名是Lysogeny Broth(非Luria-Bertani),它是由美國科學家Giuseppe Bertani在1951年獨立開發。但現在常用的LB配方是由Miller修改而成,主要是去掉Glucose并把NaCl濃度從0.5 g/L增加到10 g/L。本產品就是根據Miller配方制備的干粉型培養基,本產品加水滅菌后即得液體培養基,即可使用。常溫運輸及保存,有效期兩年。
Bertani, G. Studies on lysogenesis.I. The mode of phage liberationby lysogenic Escherichia coli . J.Bacteriol . 62:293-300. 1951Lennox, E. S. 1955. Transduction oflinked genetic characters of the host bybacteriophage P1. Virology . 1:190-206
干粉型LB培養基細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
干粉型LB培養基質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
干粉型LB培養基(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
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