小RNA克隆試劑盒產品及特點
克隆是分析低分子RNA的有效方法之一。由于低分子RNA不具有PolyA tail，需在低分子RNA的5’端和3’端分別加上RNA接頭或者RNA/DNA雜合形式的接頭，經RT-PCR后便可以進行克隆。小RNA克隆試劑盒是根據以上原理開發的，其流程圖如下：
對低分子RNA進行cDNA擴增的試劑盒，經本試劑盒擴增的cDNA可以用于各種載體的克隆。擴增得到的cDNA可以直接用于TA克隆，或者利用接頭中帶有的酶切位點進行克隆。
備注
使用本試劑盒對小RNA進行克隆時的操作流程見圖，詳細步驟如下：
1. 將小RNA進行BAP處理，5’端去磷酸化。
2. BAP處理后的小RNA的3’端與生物素化的RNA/DNA接頭連接。
3. 用標記Strepto avidin的磁珠，回收帶有生物素的RNA/DNA接頭的SmallRNA，然后進行5’端磷酸化反應。
4. 將5’端連接上RNA/DNA嵌合的接頭后，使用RT Primer和M-MLV反轉錄酶進行反轉錄反應。
5. 從磁珠上回收合成的cDNA后，進行PCR反應。
6. PCR片段經限制酶酶切后，回收、克隆。
小RNA克隆試劑盒細菌的培養和收集：
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
小RNA克隆試劑盒質粒DNA少量快速提取：
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
小RNA克隆試劑盒（一）、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。
2、棄上清，將管倒置于衛生紙上幾分鐘，使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY100204 一站式PCR-SSCP套裝 1套
XY101003 RAPD PCR試劑盒(含銀染) 100次
XY111109 DOP-PCR試劑盒 50次
XY130408 eTS抑制性差減雜交PCR試劑盒 10次
克隆及表達
XY60105加A試劑盒50次XY60106加T試劑盒50次XY60107DNA粘轉平試劑盒20次XY130813DNA磷酸化試劑盒20次XY130828DNA去磷酸化試劑盒20次XY4610G載體2μgXY51104B載體2μgXY60603即用型藍白T載體A型(T7-SP6，有MCS)20次XY120512即用型藍白T載體B型(T7-T3,有MCS)20次XY120513即用型藍白T載體C型(T7-T3，無MCS)20次XY120514即用型藍白T載體D型(無啟動子，有MCS)20次XY120515即用型藍白T載體E型(無啟動子，無MCS)20次XY60803可保種型藍白T載體50ngXY131233零背景T載體20次XY60908質粒(載體)系列產品2μgXY120402PCR專用LIC克隆套裝1ugXY130859M13mp18 DNA10μg(A)|10μg(B)XY90407Lambda DNA5μg(A)|250μg(B)|250μg(C)XY130860φX174 RFⅠDNA30μgXY130861φX174RF Ⅱ DNA30μg
