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Tuner(DE3)plysS菌種產品及特點
Tuner系列菌株是LacZY去除的BL21突變菌株,這可以通過細胞培養來調節蛋白表達水平。Tuner系列菌株是lon和ompT蛋白酶缺陷型菌株。
Tuner(DE3)plysS菌株的蛋白表達水平可以通過IPTG濃度進行精確的調節,具有嚴格的濃度依賴性。Tuner(DE3)plysS菌株含有的DE3是溶源性的 λDE3,在lacUV5啟動子下攜帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。Tuner(DE3)plysS含有的pLSs質粒能產生T7溶菌酶,可以有效降低目的基因的基礎表達水平。pLySs質粒使得該菌株具有氯霉素抗性。pLySs質粒的起始復制位點是p15 Origin, 使得該質粒能夠和pUC-及pBR322-衍生的質粒互相共存。該菌株適用于pET系列載體及其他T7啟動子系列載體。
其基因型如下:
F-omp T hsd SB(rB-mB-) gal dcm lac Y1(DE3) plysS(CamR)
低溫運輸,-80℃保存,有效期一年。
Tuner(DE3)plysS菌種細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
Tuner(DE3)plysS菌種質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
Tuner(DE3)plysS菌種(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY2601 DNAzol 基因組DNA快速提取試劑 50ml/100ml
XY3201 石蠟包埋組織DNA快速提取試劑盒 50次/100次
XY3601 尿液基因組DNA快速提取試劑盒 50次
XY3701 海洋動物組織基因組DNA快速提取試劑盒 50次/100次
XY4201 蛋白酶K 100mg
XY3301 2 x SYBR Green qPCR Mix (Sybr green熒光染料法定量PCR) 50次×50μl/200次×50μl
XY3901 2 x Real Time PCR Mix (Probe熒光探針法定量PCR) 40次×50μl/200次×50μl
XY3601 TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit (兩步法熒光定量反轉錄PCR試劑盒) 25次×50μl/50次×50μl
XY4601 THERMOscript SYBR Green qRT-PCR Kit(兩步法熒光定量耐熱反轉錄PCR試劑盒) 25次×50μl/50次×50μl
XY4101 TUREscript One Step qRT-PCR Kit (一步法熒光定量反轉錄PCR試劑盒) 50次×50μl/100次×50μl