Stbl2菌種產(chǎn)品及特點(diǎn)

Stbl2菌株來源于JM109菌株，Stbl2是不穩(wěn)定質(zhì)粒DNA例如逆病毒質(zhì)粒或者含有高度重復(fù)序列質(zhì)粒的優(yōu)秀克隆擴(kuò)增菌株。最大能夠適用于>20kb質(zhì)粒的擴(kuò)增。Stbl2不含有ccdB抗性基因，不能用來擴(kuò)增含ccdB基因的質(zhì)粒。Stbl2含有recA1重組酶缺陷，能夠有效防止質(zhì)粒和基因組的重組發(fā)生率。Stbl2含有endA1限制性內(nèi)切酶缺陷，能夠有效提升質(zhì)粒抽提的質(zhì)量。

Stbl2菌株內(nèi)的mcrA基因突變和mcrBChsdRMS-mrr缺失，允許細(xì)胞克隆擴(kuò)增含有甲基化序列的DNA質(zhì)粒或者基因組。Stbl2菌株不能被用于藍(lán)白斑篩選。

其基因型如下：

F- mcr A Δ(mcr BC-hsdRMS-mrr ) rec A1end A1lon gyr A96 thi sup E44 rel A1 λ-Δ(lac -pro AB)

低溫運(yùn)輸，-80℃保存，有效期一年。

Stbl2菌種細(xì)菌的培養(yǎng)和收集：

將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對數(shù)生長后期。

Stbl2菌種質(zhì)粒DNA少量快速提取：

質(zhì)粒DNA小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡便、快速，能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　Stbl2菌種（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。

　　8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。

XY880927    大提柱式細(xì)菌DNAOUT    4次(A)|4次(B)
XY860806    一步式細(xì)菌DNAOUT    50次
XY870702    分枝桿菌DNAOUT    50次
XY870703    柱式分枝桿菌DNAOUT    50次
XY860701    土壤DNAOUT    30次|100次
XY871205    柱式土壤DNAOUT    50次
XY880928    大提柱式土壤DNAOUT    4次
XY8101112    柱式水樣DNAOUT    50次
XY83674    一管式病毒DNAOUT    50次|200次
XY870701    柱式病毒DNAOUT    50次
XY880921    96孔板病毒DNAOUT(離心法)    1次|5次
XY880101    一管式病毒DNA-RNAOUT    50次
XY870202    柱式酵母質(zhì)粒DNAOUT    50次
XY890607    柱式BAC DNAOUT    50次
XY890608    中提柱式BAC DNAOUT    5次
XY860205    柱式質(zhì)粒 DNAOUT    50次|100次
XY8120601    革氏陽性細(xì)菌質(zhì)粒DNAout    50次
XY860807    柱式無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAOUT    50次

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