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Rosetta-gami(DE3)菌種產品及特點
Rosetta-gami系列菌株來源于Origami系列宿主菌,該系列菌株的優點是除了含有Origami菌株原有的TrxB和Gor基因突變提高含二硫鍵正確折疊蛋白的高效表達,同時含有Rosetta系列菌株中含有的真核細胞稀有密碼子。該菌株同時集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的優點。Rosetta-gami(DE3)菌株含有pRARE質粒,包含稀有密碼子,能夠有效提升真核細胞蛋白的表達水平,pRARE質粒具有氯霉素抗性;DE3是溶源性的 λDE3,帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。
Rosetta-gami(DE3)菌株同時具有氯霉素,卡那,鏈霉素和四環素四種抗生素抗性,適用于pET系列載體及其他T7啟動子系列載體。被建議使用于含有Bla標記的氨芐抗性表達質粒。
其基因型如下:
Δ(ara–leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuIIphoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F’[lac+ lacIq pro ] gor522 ::Tn10trxB pRARE (CamR,KanR StrR, TetR)
低溫運輸,-80℃保存,有效期一年。
Rosetta-gami(DE3)菌種細菌的培養和收集:
將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。
Rosetta-gami(DE3)菌種質粒DNA少量快速提取:
質粒DNA小量提取法對于從大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA十分有用。這些方法共同特點是簡便、快速,能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
Rosetta-gami(DE3)菌種(一)、煮沸法
1、將1.5ml培養液倒入eppendorf管中,4℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20ml進行電泳檢查。
XY011 大豆SS RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY012 玉米MS RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY013 大豆35S/SS RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY014 玉米35S/MS RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY015 通用35S RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY016 大豆NOS/SS RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY017 玉米NOS/MS RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY018 NOS通用型RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY019 大豆RR/SS RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY020 大豆RR/Total Plant DNA RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY021 玉米Bt176/MS RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY022 玉米Bt176/Total Plant DNA RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒
XY023 玉米Bt11/MS RT-PCR檢測試劑盒 40次/盒