RosettaBlue(DE3)菌種產(chǎn)品及特點(diǎn)

RosettaBlue系列菌株衍生于NovaBlue菌株， 對于包含有稀有密碼子的真核蛋白， 是加強(qiáng)型的蛋白表達(dá)菌株。RosettaBlue(DE3)菌株通過細(xì)胞內(nèi)具有氯霉素抗性的pRARE質(zhì)粒，補(bǔ)充提供了AGG,AGA, AUA, CUA, CCC和GGA這些稀有密碼子的tRNA。

DE3是溶源性的 λDE3，在lacUV5啟動子下攜帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。RosettaBlue(DE3)無法使用藍(lán)白斑篩選，因?yàn)樵诩?xì)胞中的DE3溶源噬菌體DNA序列上含有LacZ的α肽段編碼序列。該菌株適用于pET系列載體及其他T7啟動子系列載體。

其基因型如下：

endA1 hsdR17(rK12–mK12+) supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F proA+B +lacIqZΔM15 ::Tn10 ] pRARE(CamR, TetR)

低溫運(yùn)輸，-80℃保存，有效期一年。

RosettaBlue(DE3)菌種細(xì)菌的培養(yǎng)和收集：

將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時至對數(shù)生長后期。

RosettaBlue(DE3)菌種質(zhì)粒DNA少量快速提取：

質(zhì)粒DNA小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡便、快速，能同時處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。

　RosettaBlue(DE3)菌種（一）、煮沸法

　　1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。

　　2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。

　　3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。

　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。

　　5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。

　　6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。

　　7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。

　　8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。

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