當(dāng)QGY-7703人肝癌細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí)，可以凍存細(xì)胞，在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm離心5min，棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為4-6×106/ml，將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL，  規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

培養(yǎng)基：RPMI-1640(GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

QGY-7703人肝癌細(xì)胞傳代操作步驟：

一、貼壁細(xì)胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)。

2.吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞。

3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用。

4.QGY-7703人肝癌細(xì)胞用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。

二、懸浮細(xì)胞傳代

1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min。

2.棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液。

3.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

QGY-7703人肝癌細(xì)胞 培養(yǎng)的過程中，經(jīng)常見到黑色的顆粒或小黑點(diǎn)，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？原因：

黑點(diǎn)，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢(shì)，那么就有可能是污染了，需要處理；

2、如果小黑點(diǎn)沒有增殖趨勢(shì)，且不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，也不影響實(shí)驗(yàn)的話，則可能

 a、是“黑膠蟲”，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭(zhēng)議。有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動(dòng)物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠QGY-7703人肝癌細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，開始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候， 細(xì)胞生長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開展和進(jìn)行。以前（這個(gè)至少是10年以前），很多實(shí)驗(yàn)室在養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用國(guó)產(chǎn)血清，那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過關(guān)，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國(guó)產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。

 b、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運(yùn)動(dòng)。

 c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)C6    大鼠細(xì)胞株    腦和神經(jīng)系統(tǒng)    5x10^5    大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞
RSC96    大鼠細(xì)胞株    腦和神經(jīng)系統(tǒng)    5x10^5    大鼠雪旺細(xì)胞
BRL    大鼠細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    大鼠肝細(xì)胞
H-4-Ⅱ-E    大鼠細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    大鼠肝細(xì)胞瘤
WB-F344    大鼠細(xì)胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    大鼠肝上皮樣干細(xì)胞
H9c2    大鼠細(xì)胞株    循環(huán)系統(tǒng)    5x10^5    大鼠心肌細(xì)胞
USMC    大鼠細(xì)胞株    循環(huán)系統(tǒng)    5x10^5    大鼠血管平滑肌細(xì)胞
cos-1    其他    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    非洲綠猴腎細(xì)胞
MA104    其他    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    羅猴胎腎細(xì)胞
vero    其他    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    非洲綠猴腎細(xì)胞
CHO    其他    生殖系統(tǒng)    5x10^5    倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞
CHO-K1    其他    生殖系統(tǒng)    5x10^5    倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞亞株
DH82    其他    血液、淋巴系統(tǒng)    5x10^5    狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞
PIEC    其他    血液、淋巴系統(tǒng)    5x10^5    豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
CCC-SMC-1    其他    循環(huán)系統(tǒng)    5x10^5    兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
A-204    人源化細(xì)胞株    骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人橫紋肌肉瘤細(xì)胞
A-375    人源化細(xì)胞株    骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人惡性黑色素瘤細(xì)胞
A-431    人源化細(xì)胞株    骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人皮膚鱗癌細(xì)胞
A875    人源化細(xì)胞株    骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人黑色素瘤細(xì)胞
FLS    人源化細(xì)胞株    骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    成纖維樣滑膜細(xì)胞
HaCaT    人源化細(xì)胞株    骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人永生化表皮細(xì)胞
hFOB 1.19    人源化細(xì)胞株    骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    SV40 轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞
HT-1080    人源化細(xì)胞株    骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人纖維肉瘤細(xì)胞
MG-63    人源化細(xì)胞株    骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人成骨肉瘤細(xì)胞

上海澤葉生物科技有限公司是一家服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域的高新技術(shù)企業(yè)，主要為科研機(jī)構(gòu)、高校、院所及企業(yè)產(chǎn)品開發(fā)研究提供所需要的科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)等。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、材料科學(xué)，通用試劑、藥物合成試劑、手性化合物、催化劑及配體、分析試劑、生物試劑，檢測(cè)試劑等等。
    澤葉生物事業(yè)朝氣蓬勃，公司坐落在松江區(qū)設(shè)有生產(chǎn)研發(fā)基地和龐大的倉(cāng)儲(chǔ)物流中心，憑著一支富有創(chuàng)造天賦的專業(yè)團(tuán)隊(duì)，新技術(shù)、新產(chǎn)品層出不窮。目前，澤葉產(chǎn)品已達(dá)30000 多種，并呈持續(xù)增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)。旨在為科研事業(yè)和工業(yè)領(lǐng)域客戶提供系統(tǒng)的產(chǎn)品資源及配套技術(shù)服務(wù)。
   澤葉生物以“陽春布德澤、萬物生根葉””的胸懷和精神樹立【澤葉】，公司秉承客戶至上、服務(wù)至誠(chéng)；以質(zhì)量第一、誠(chéng)信為本的經(jīng)營(yíng)理念，致力于與化學(xué)、醫(yī)藥、分析、食品、能源、材料等領(lǐng)域的客戶建立互信、長(zhǎng)久的合作關(guān)系。